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技術分析:ELISA實驗常見問題解答

時間:2015/11/4閱讀:1489
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吉林醫藥學院張老師前期在我司訂購小鼠ELISA試劑盒,之后咨詢我司相關問題,錢及時技術人員為張老師解答,解答詳情如下:

1、為什么ELISA實驗必須設置復孔?

答:為獲得更準確的實驗結果,強烈建議標準品及樣本進行復孔檢測,因為復孔檢測可以:計算平均值,確保實驗結果更準確;解決實驗中誤操作造成的跳孔現象;計算CV值,對實驗的操作和試劑盒的精密度進行評估。

2、為什么所有試劑和檢測樣本要平衡至室溫后再進行加樣操作?

答:溫度是ELISA結合反應的重要影響因素。為了使所有樣本在一致的溫度下反應,實驗前務必將所有試劑平衡至室溫,包括檢測樣本。避免因溫度的動力學反應差異而導致ELISA檢測結果的不準確。

3、 重復性差是怎么回事?

答:對于這一點,很有可能是:

① 樣品數量不一,加樣時間長短不一(恒遠來解決:重復某一樣品時,加樣時間盡可能與*次接近)。

③ 酶標儀濾光片不對或輸入波長不對(恒遠來解決:TMB顯色用450/630波長)。

④ 酶標儀測定重復性差(恒遠來解決:校對酶標儀)。

4、為什么標準曲線線性較差? 

答:需要按照推薦方式保存標準品;溶解標準品之前需短暫離心,*收集粉末;確保標準品*溶解和混勻,然后再進行后續的系列稀釋步驟,確保每一步都充分混勻且移液;顯色的恰當終止;選擇合適的數學擬合方程繪制標準曲線。

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