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Anti-DNA TPⅡα DNA拓普西異構(gòu)酶Ⅱ抗體

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公司擁有免疫、抗體制備、抗原制備、純化鑒定四大技術(shù)平臺(tái),其一站式生物研究服務(wù)平臺(tái)可為客戶提供基因合成服務(wù),多肽合成及偶聯(lián)服務(wù),蛋白表達(dá)和純化服務(wù),抗體制備和鑒定服務(wù)及細(xì)胞系建立等服務(wù)。
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公司產(chǎn)品包括科研用試劑、診斷試劑盒、抗體新藥、Anti-DNA TPⅡα DNA拓普西異構(gòu)酶Ⅱ抗體。公司客戶群廣泛分布于生物技術(shù)公司,高校,政府機(jī)構(gòu),醫(yī)院及工廠。
抗體儲(chǔ)存容器應(yīng)由不吸附蛋白質(zhì)的材料制成,常用的有聚丙烯,聚碳酸酯和硼硅酸玻璃。如儲(chǔ)存的抗體中蛋白濃度很低(10-100Mg/L),就應(yīng)另加隔離蛋白以減少容器對(duì)抗體蛋白的吸附,隔離蛋白常用0.1%-1.0%的牛血清白蛋白。
絕大多數(shù)已稀釋的抗體應(yīng)存在4℃-8℃條件下,以免凍融對(duì)抗體蛋白產(chǎn)生有害效應(yīng)。抗體原液和已分離的免疫球蛋白組分應(yīng)保存于-20℃條件下,并避免反復(fù)凍融。冷凍的抗體溶液應(yīng)置于室溫中緩慢地解凍,應(yīng)避免用高溫快速解凍。
被細(xì)菌污染的抗體常會(huì)出現(xiàn)假陽性結(jié)果,應(yīng)將污染的抗體溶液及其他試劑棄之。為防止細(xì)菌污染,可于抗體溶液中加入0.01%疊氮鈉。抗體經(jīng)真空冷凍干燥后置-20℃以下可保存3-5年。
保存稀釋后的單抗應(yīng)加入0.1%疊氮鈉濃度。大多數(shù)稀釋抗體可進(jìn)行冷凍保存,少數(shù)抗體可能會(huì)丟失抗原活性。大多數(shù)單抗,只要蛋白濃度適當(dāng),可在4℃下保存數(shù)月。 免疫測定的敏感性、特異性、測定所需時(shí)間及穩(wěn)定性往往都與抗體的親和常數(shù)、特異性以及穩(wěn)定性等有著直接,因此,對(duì)抗體通常也就是從這幾個(gè)方面著手。
(一)親和力(affinity)
通常抗體的親和力是指抗體的單個(gè)Fab片段對(duì)相應(yīng)抗原的單個(gè)決定基的特異結(jié)合能力,抗體的親和力越高,則其對(duì)相應(yīng)抗原的結(jié)合力越強(qiáng),反之亦然。而多價(jià)抗原和抗體之間的結(jié)合能力則稱為親和力(avidity),此術(shù)語體現(xiàn)了抗原和抗體的價(jià)在其結(jié)合反應(yīng)中所起的作用。因此,在親和力的測定和計(jì)算中應(yīng)考慮抗原和抗體價(jià)的作用。決定抗體親和力除了抗體結(jié)合位點(diǎn)與抗原決定簇的空間構(gòu)型的適合度外,抗體抗原分子間的分子鍵、庫侖引力、范德華引力等也有一定的作用,因此抗體抗原的親和力與反應(yīng)條件如pH也有較大的關(guān)系。
抗體的親和力測定方法較多,如ELISA和固相放射免疫測定(SPRIA)方法等。ELISA由于簡便快速,具有很好的實(shí)用性。
方法:ELISA法測定抗體親和常數(shù)。使用ELISA方法測定抗體的親和力,首先要用抗原包被96孔聚丙烯微孔板,然后,在抗原濃度保持不變,在液相狀態(tài)下加入系列不同濃度的抗體反應(yīng),再將此反應(yīng)混合物加入至抗原包被的孑L中,使用約使10%游離抗體被固相抗原吸附的反應(yīng)條件反應(yīng),使得在液相狀態(tài)下抗原抗體所達(dá)成的平衡不至受到破壞,然后從抗原存在和不存在時(shí)所測得的吸光度的差異計(jì)算游離抗體的比例,這可從吸光度對(duì)抗體濃度的校準(zhǔn)曲線的線性部分得到,ELISA測定中,當(dāng)測定顯色吸光度與抗體濃度呈線性相關(guān)時(shí),假定總的抗體濃度已知,則在反應(yīng)平衡時(shí)游離抗體濃度可使用下式測定:
nd/Bn=ODd/ODB
其中ODd為一給定的抗原濃度存在時(shí)所測得的光密度,ODB為抗原不存在時(shí)所測得的光密度,于是結(jié)合的抗體部分。可定義如下:
α= (ODB -ODd)/ ODB
但這只是在將反應(yīng)混合物加入至抗原包被孔中時(shí)液相中抗原抗體反應(yīng)平衡沒有出現(xiàn)變動(dòng)對(duì)才成立,如果在抗原包被的孔中只有約10%的游離抗體被子固相抗原捕獲,就不會(huì)破壞這種平衡。為驗(yàn)證這一點(diǎn),可以將不同已知濃度的抗體加入至包被抗原孔中溫育適當(dāng)?shù)臅r(shí)間后,再將各孔中的反應(yīng)物移至另一塊相同包被的板孔中溫育相同的時(shí)間,則轉(zhuǎn)移前后加入不同抗體濃度孔中的OD值的差異不應(yīng)超過10%
結(jié)合反應(yīng)的數(shù)據(jù)可以下式表示:
Ny/sc=K(Bn-ny)
使用結(jié)合的抗體部分α,ny和sc的量可表示為:
ny=αBn
sc=As-Bn
α/sc=K(1-α)
即可構(gòu)建。α/sc對(duì)α的Scatchard圖,圖上的斜率即為K值。
如果總的抗體結(jié)合位點(diǎn)濃度(Bn)未知,則可通過質(zhì)量作用定律的Klotz公式得到K值。
(二)特異性(specificity)
抗體的特異性關(guān)系到免疫測定的特異性,因此特異性是抗體鑒定的一項(xiàng)極為重要的指標(biāo)。特異性的測定有兩種方法,*種方法是證明特定的抗體對(duì)抗原沒有交叉反應(yīng)性,也就是說,除了用來免疫制備抗體的抗原外.,抗體對(duì)其他相近抗原沒有可測定的反應(yīng)性。第二種方法是證明在抗體對(duì)原始特定抗原的結(jié)合反應(yīng)中,其他相近抗原分子對(duì)這種結(jié)合反應(yīng)無干擾作用。
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