豚鼠ELISA試劑盒本法主要用于對(duì)病原體抗體的檢測而進(jìn)行傳染病的診斷。間接法的優(yōu)點(diǎn)是只要變換包
被抗原就可利用同一酶標(biāo)抗抗體建立檢測相應(yīng)抗體的方法。
間接法成功的關(guān)鍵在于抗原的純度。雖然有時(shí)用粗提抗原包被也能取得實(shí)際有效的結(jié)
果,但應(yīng)盡可能予以純化,以提高試驗(yàn)的特異性。特別應(yīng)注意除去能與一般健康人血清發(fā)
生反應(yīng)的雜質(zhì),例如以E.Coli為工程酶的重組抗原,如其中含有E.Coli成份,很可能與受過
E.Coli感染者血甭中的抗E.Coli抗體發(fā)生反應(yīng)。抗原中也不能含有與酶標(biāo)抗人Ig反應(yīng)的物
質(zhì),例如來自人血漿或人體組織的抗原,如不將其中的Ig去除,試驗(yàn)中也發(fā)生假陽性反
應(yīng)。另外如抗原中含有無關(guān)蛋白,也會(huì)因竟?fàn)幬蕉绊懓恍Ч?br /> 間接法中另一種干擾因素為正常血清中所含的高濃度的非特異性。病人血清中受檢的
特異性IgG只占總IgG中的一小部分。IgG的吸附性很強(qiáng),非特異IgG可直接吸附到固相載體
上,有時(shí)也可吸附到包被抗原的表面。因此在間接法中,抗原包被后一般用無關(guān)蛋白質(zhì)
(例如牛血清蛋白)再包被一次,以封閉(blocking)固相上的空余間隙。另外,在檢
測過程中標(biāo)本須先行稀釋(1:40~1:200),以避免過高的陰性本底影響豚鼠ELISA試劑盒結(jié)果的判斷。