病毒轉(zhuǎn)染小鼠細(xì)胞
細(xì)胞來(lái)源于美國(guó)ScienCell實(shí)驗(yàn)室、美國(guó)ATCC細(xì)胞庫(kù)，所有細(xì)胞均為原代細(xì)胞，非細(xì)胞系。細(xì)胞經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的控制（從組織來(lái)源、實(shí)驗(yàn)室條件等方面），純度可達(dá)98％。不同的細(xì)胞傳代次數(shù)不一。多數(shù)細(xì)胞種類(lèi)是從胚胎提取，于原代（或二代）凍存在液氮中。病毒轉(zhuǎn)染小鼠細(xì)胞采用干冰運(yùn)輸，客戶收到細(xì)胞后，從干冰中取出放入液氮中保存，待實(shí)驗(yàn)安排好后，解凍后即可以進(jìn)行復(fù)蘇培養(yǎng)。美國(guó)ATCC細(xì)胞庫(kù)、ScienCell實(shí)驗(yàn)室的細(xì)胞、培養(yǎng)基都是經(jīng)過(guò)嚴(yán)格檢驗(yàn)，分離、配制而成，產(chǎn)品質(zhì)量過(guò)硬。
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細(xì)胞培養(yǎng)常見(jiàn)問(wèn)題
1.原代細(xì)胞與細(xì)胞系有什么區(qū)別？
細(xì)胞培養(yǎng)物來(lái)源于原代外植體或分散的細(xì)胞懸液。通常在這樣的培養(yǎng)物中細(xì)胞增殖形成匯合地單層細(xì)胞或密集地細(xì)胞懸液。根據(jù)傳統(tǒng)定義，*次收獲和接種的細(xì)胞被稱為原代細(xì)胞[Freshney, R.I. （1987）. Culture of Animal Cells. A Manual of Basic Technique. （New York, Alan R. Liss, Inc.）]. 這類(lèi)細(xì)胞生命周期有限，在有限的生命周期內(nèi)需掌握好細(xì)胞zui大的生長(zhǎng)空間，以保持細(xì)胞群中基因型和表型的*性。
細(xì)胞系是不斷生長(zhǎng)，分化的細(xì)胞群，因其經(jīng)過(guò)遺傳改造，致使其具有無(wú)限增長(zhǎng)的潛能。體外生長(zhǎng)的細(xì)胞系用于醫(yī)療或科研。實(shí)際上，連續(xù)細(xì)胞系可以用大量次培養(yǎng)基培養(yǎng)，隨著代數(shù)的增加細(xì)胞的基因型和表型都有可能發(fā)生改變。
需要指出的是，在不同的科研小組中這些術(shù)語(yǔ)的定義會(huì)有所不同。許多研究員不用細(xì)胞系這個(gè)詞表示細(xì)胞群除非細(xì)胞經(jīng)過(guò)了遺傳改造。
2.倍增和代數(shù)有什么區(qū)別？
倍增是培養(yǎng)物中細(xì)胞總數(shù)加倍，通常是指細(xì)胞指數(shù)或?qū)?shù)生*。代數(shù)是指細(xì)胞群從培養(yǎng)瓶中移出，傳代培養(yǎng)過(guò)程的次數(shù)，傳代培養(yǎng)的目的是使細(xì)胞處于低密度以刺激其進(jìn)一步生長(zhǎng)。
3.接收到的凍存細(xì)胞該如何處理？
收到包裝箱后，立即將凍存細(xì)胞從干冰移入液氮中凍存。此過(guò)程盡量快以避免升溫。不要將細(xì)胞儲(chǔ)存在-80℃，這樣會(huì)對(duì)細(xì)胞造成不可挽回的傷害。
4.有多少經(jīng)驗(yàn)才能開(kāi)始正常人類(lèi)細(xì)胞培養(yǎng)？
*有經(jīng)驗(yàn)者在無(wú)菌環(huán)境下用層流凈化罩工作，如果有經(jīng)驗(yàn)的話對(duì)其它細(xì)胞類(lèi)型也是很有利的。如果你是細(xì)胞培養(yǎng)的初學(xué)者或打算建立細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室，我們會(huì)為你提供幫助。請(qǐng)的細(xì)胞培養(yǎng)專家。
5.凍存的細(xì)胞該如何開(kāi)始培養(yǎng)？
⑴將一管細(xì)胞從液氮罐中取出，注意保護(hù)手和眼睛。
⑵用10秒鐘時(shí)間將小管的蓋子擰松1/4以去除殘留在螺紋處的液氮，然后將蓋子蓋緊。
⑶將小管放入37℃水浴中，輕輕握住并旋轉(zhuǎn)，直到管內(nèi)物體*融化。
⑷將小管立即從水浴中拿出，擦干，轉(zhuǎn)入無(wú)菌環(huán)境。
⑸用70％的酒精沖洗小管，然后擦去多余酒精。
⑹打開(kāi)蓋子，注意手指不要碰到里面的螺紋。用1ml離心管離心內(nèi)容物。
⑺平衡管內(nèi)物，用多聚賴氨酸包被培養(yǎng)瓶（多數(shù)細(xì)胞用T-75的培養(yǎng)瓶）。多數(shù)細(xì)胞類(lèi)型*接種密度為每平方厘米5000細(xì)胞。
⑻蓋好蓋子，輕輕搖晃培養(yǎng)瓶以使細(xì)胞分布均勻。若需要?dú)怏w交換可打開(kāi)蓋子。
⑼將培養(yǎng)瓶放放培養(yǎng)箱中（37℃,5%CO2,95%空氣）
⑽植入培養(yǎng)后第6-16小時(shí)更換一次培養(yǎng)基以去除殘留的二甲基亞楓和未貼壁的細(xì)胞。
6.當(dāng)我*次植入正常人類(lèi)細(xì)胞時(shí)需要旋轉(zhuǎn)細(xì)胞去除二甲基亞楓嗎？
*次植入正常凍存細(xì)胞時(shí)，我們不*旋轉(zhuǎn)去除二甲基亞楓。離心過(guò)程比殘留二甲基亞楓對(duì)細(xì)胞的傷害更大，尤其是不正當(dāng)?shù)母咚傩D(zhuǎn)。我們的經(jīng)驗(yàn)是如果二甲基亞楓的濃度很低，細(xì)胞不會(huì)受毒害。如果你將1ml細(xì)胞植入已加入15ml培養(yǎng)基的T-75培養(yǎng)瓶中，二甲基亞楓的濃度將小于0.67％，沒(méi)有發(fā)現(xiàn)負(fù)面影響。實(shí)際上，如果細(xì)胞的接種密度為每平方厘米5000-10000，二甲基亞楓的濃度很低。
7.多久更換一次培養(yǎng)基？
一般2-3天更換一次培養(yǎng)基，這取決于細(xì)胞生長(zhǎng)的速度。許多細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室通常在周一，周三，周五更換培養(yǎng)基。
注意：*次植入凍存的細(xì)胞后，在6-16小時(shí)內(nèi)更換培養(yǎng)基，以去除殘留的二甲基亞楓和死亡細(xì)胞。
8.我能擴(kuò)培和再冰凍的正常人類(lèi)細(xì)胞嗎？
這取決于細(xì)胞類(lèi)型。一些細(xì)胞類(lèi)型像神經(jīng)細(xì)胞，神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞和一些生長(zhǎng)緩慢的上皮細(xì)胞不*擴(kuò)培和再冰凍。其它的細(xì)胞類(lèi)型像成纖維細(xì)胞、星形細(xì)胞、腎系膜細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞等等可以擴(kuò)培和再冰凍。然而，需要注意的是再冰凍的過(guò)程可能導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)性能的改變。如果你想要再冰凍細(xì)胞，請(qǐng)親自咨詢我們的并使用SF-CFM，和特定的無(wú)血清培養(yǎng)基，以獲得的效果。
9.我能長(zhǎng)時(shí)間凍存的培養(yǎng)基嗎？
不*凍存培養(yǎng)基，冰凍高營(yíng)養(yǎng)的培養(yǎng)基將導(dǎo)致培養(yǎng)基成分不可逆降解。
10.培養(yǎng)瓶中應(yīng)該加入多少體積的培養(yǎng)基？
*用量：T-25培養(yǎng)瓶5ml,T-75培養(yǎng)瓶15ml,T-150培養(yǎng)瓶30ml。
11.使用你們的專業(yè)培養(yǎng)基，還需要另外的補(bǔ)充物嗎？
公司的培養(yǎng)基是為每一類(lèi)細(xì)胞特定研制的。加入相關(guān)的培養(yǎng)成分（生長(zhǎng)因子，抗生素和胎牛血清）到基本培養(yǎng)液中，你就得到了*培養(yǎng)基。其它的不再需要。
12.*培養(yǎng)基的保質(zhì)期是多久？
加入所有的補(bǔ)充物后，培養(yǎng)液就成了*培養(yǎng)基。如果*培養(yǎng)基儲(chǔ)存在4℃條件下，并且每次使用時(shí)置于常溫的時(shí)間盡量少，*培養(yǎng)基的保質(zhì)期為6周。
13.可以使用自己的或其它公司的培養(yǎng)基培養(yǎng)的正常人類(lèi)細(xì)胞嗎？
公司的正常人類(lèi)細(xì)胞使用我們的*培養(yǎng)基培養(yǎng)并通過(guò)測(cè)試，細(xì)胞已適應(yīng)此*培養(yǎng)基。使用其它的培養(yǎng)基，由于需要適應(yīng)過(guò)程可能會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞不良生長(zhǎng)。我們*使用我們特定的培養(yǎng)基培養(yǎng)正常人類(lèi)細(xì)胞。
14.正常人類(lèi)細(xì)胞能傳多少代？
不使用代數(shù)描述細(xì)胞的生長(zhǎng)潛能，因?yàn)槊恳晃豢蛻粲貌煌姆至鞅取１ＷC在培養(yǎng)過(guò)程中使用我們的培養(yǎng)基和試劑，正常人類(lèi)細(xì)胞達(dá)到15倍增倍增（除了在說(shuō)明書(shū)中已指明的）。
15.正常人類(lèi)細(xì)胞*的分流比是多少？ 
公司不*對(duì)正常人類(lèi)細(xì)胞使用分流比，因?yàn)樵谟?處理后細(xì)胞的產(chǎn)量會(huì)有所變化。我們*在*作用后對(duì)細(xì)胞計(jì)數(shù)，接種密度為5000-10000細(xì)胞每平方厘米（在細(xì)胞說(shuō)明書(shū)中有*接種密度）。
16. 可以使正常人類(lèi)細(xì)胞處于實(shí)驗(yàn)性饑餓嗎？ 
可以將正常人類(lèi)細(xì)胞處于實(shí)驗(yàn)性饑餓。細(xì)胞在沒(méi)有添加物的基本培養(yǎng)基中可以維持一段時(shí)間，但細(xì)胞必須處于良好的環(huán)境中。過(guò)了這段時(shí)期，實(shí)驗(yàn)應(yīng)終止，因?yàn)闀r(shí)間過(guò)長(zhǎng)將導(dǎo)致細(xì)胞死亡。在實(shí)驗(yàn)前測(cè)試一下細(xì)胞在饑餓條件下能存活多長(zhǎng)時(shí)間，這取決于多種因素。
17. 可以用質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染正常人類(lèi)細(xì)胞嗎？
當(dāng)然，我們已成功轉(zhuǎn)染了多種細(xì)胞，比如皮膚成纖維細(xì)胞，肺成纖維細(xì)胞，皮膚微血管內(nèi)皮細(xì)胞等等。
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96T/48T小鼠鑰孔蟲(chóng)戚血藍(lán)蛋白（KLH）ELISA試劑盒 Mouse keyhole limpet hemocyanin,KLH ELISA試劑盒
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