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偶聯(lián)ELISA試劑盒與親和素和*
一、親合素主要包括卵白親合素、鏈親合素、卵黃親合素及類親合素等。后兩種因其特異性親合力低,研究不多,前兩種目前已深入研究并得到廣泛應(yīng)用。
親合素又稱卵白素或抗*,分子量為68000,pI 10~10.5;在pH9~13緩沖液中性質(zhì)均穩(wěn)定,耐熱并耐多種蛋白水解酶的作用。天然親合素為堿性蛋白,由4個相同的亞單位構(gòu)成4聚體;每個親合素亞單位通過其結(jié)構(gòu)中的*殘基與*中的Ureido環(huán)(I環(huán))結(jié)合。因此,1個親合素分子存在4個與*分子結(jié)合位點(diǎn),其結(jié)合常數(shù)(Ka)高 達(dá)1015mol/L。通常,親合素的活性單位是以親合素結(jié)合*的量來表示的,即以能結(jié)合1ug*所需要的親合素量為1個親合素活性單位。一般1ug親合素約含13~15個活性單位。
二、*又稱維生素H,分子量244.31,存在于蛋黃中。用化學(xué)方法制成的衍生物,*-羥基琥珀亞胺酯(BNHS)可與蛋白質(zhì)、糖類和酶等多種類型的大小分子形成*醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)整理化的產(chǎn)物。親和素與*的結(jié)合,雖不屬免疫反應(yīng),但特異性強(qiáng),親和力大,兩者一經(jīng)結(jié)合就極為穩(wěn)定。由于1個親和素分子有4個*分子的結(jié)合位置,可以連接更多的*化的分子,形成一種類似晶格的復(fù)合體。因此把親和素和*與ELISA試劑盒偶聯(lián)起來,就可大大提高ELISA試劑盒的敏感度。
親和素-*系統(tǒng)在ELISA試劑盒中的應(yīng)用有多種形式,可用于間接包被,亦可用于終反應(yīng)放大。可以在固相上先預(yù)包被親和素,原用吸附法包被固相的抗體或抗原與*結(jié)合,通過親和素-*反應(yīng)而使*化的抗體或抗在相化。這種包被法不僅可增加吸附的抗體或抗原量,而且使其結(jié)合點(diǎn)充分暴露。另外,在常規(guī)ELISA試劑盒中的酶標(biāo)抗體也可用*化的抗體替代,然后連接親和素-酶結(jié)合物,以放大反應(yīng)信號。
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