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上海金穗生物科技有限公司
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中性粒細胞趨化試驗檢測IL-8

時間:2012-11-27閱讀:426
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 ID8是中性粒細胞的激活劑和趨化因子;本法通過檢測中性粒細胞的遷移距離來反映IL-8活性。
(1)配制2倍濃度的DMEM培養液100mL,其中含20mL的FCS,75mgNaHC03,置48C水浴預溫。
(2)配制2%瓊脂糖,水浴中保溫48℃左右時,與上述2XDMEM等量混勻。
(3)制片(3mlJ片),室溫凝固后,放4~C 30~60min進一步凝固,打孔。
(4)分離人外周血中性粒細胞,用DMEM調整細胞濃度為2.5×105/mL,取lOgL細胞懸液加人各組中心孔,上孔分別加10/uL含趨化因子的待檢樣品及rlL-8或其他陽性對照趨化因子,下孔加lOgLDMEM作陰性對照。
(5)將玻片放濕盒中,37~C溫育2h后,甲醇固定30min,瑞氏染液染片并干燥。
(6)顯微鏡下分別測量細胞從中心孑L邊緣朝向樣品孔游走的距離(趨化游走距離)及朝向陰性對照孔的游走距離(自發游走距離),趨化活性以趨化指數表示。
為證實樣品中趨化效應是IL-8特異的,還需將抗IL-8中和抗體先與待測樣品混合,孵育1h后,加入玻片孔中,觀察趨化反應。亦可用其他相關抗體阻斷試驗區別IL-8及其他趨化因子的作用。

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