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分光光度計的測量方法
分光光度計的測量方法主要有以下幾種方法
Lowry 法：以zui早期的 Biuret 反應(yīng)為基礎(chǔ)，并有所改進(jìn)。蛋白質(zhì)與Cu2+反應(yīng)，產(chǎn)生藍(lán)色的反應(yīng)物。但是與 Biuret相比，Lowry 法敏感性。缺點是需要順序加入幾種不同的反應(yīng)試劑;反應(yīng)需要的時間較長;容易受到非蛋白物質(zhì)的影響;含EDTA，Triton x-100，ammonia sulfate 等物質(zhì)的蛋白不適合此種方法。
BCA(Bicinchoninine acid assay)法：這是一種較新的、敏感的蛋白測試法。要分析的蛋白在堿性溶液里與Cu2+反應(yīng)產(chǎn)生 Cu+，后者與 BCA 形成螯合物，形成紫色化合物，吸收峰在 562 nm波長。此化合物與蛋白濃度的線性關(guān)系*，反應(yīng)后形成的化合物非常穩(wěn)定。相對于 Lowry 法，操作簡單，敏感度。但是與 Lowry法相似的是容易受到蛋白質(zhì)之間以及去污劑的干擾。
Bradford 法：這種方法的原理是蛋白質(zhì)與考馬斯亮蘭結(jié)合反應(yīng)，產(chǎn)生的有色化合物吸收峰595 nm。其zui大的特點是，敏感度好，是 Lowry 和 BCA 兩種測試方法的 2倍;操作簡單，速度快;只需要一種反應(yīng)試劑;化合物可以穩(wěn)定1小時，方便結(jié)果;而且與一系列干擾 Lowry，BCA 反應(yīng)的還原劑(如DTT，巰基乙醇)相容。但是對于去污劑依然是敏感的。zui主要的缺點是不同的品會導(dǎo)致同一樣品的結(jié)果差異較大，無可比性。
某些初次接觸比色法測定的研究者可能為比色法測出的結(jié)果并不一致，感到迷惑，究竟該相信哪種方法?由于方法反應(yīng)的基團(tuán)以及顯色基團(tuán)不一，所以同時使用幾種方法對同一樣品得出的樣品濃度無可比性。例如：Keller 等測試人奶中的蛋白，結(jié)果 Lowry，BCA測出的濃度明顯于Bradford，差異顯著。即使是測定同一樣品，同一種比色法選擇的樣品不一致，測試后的濃度也不一致。
水分測定儀，哈爾濱宇達(dá)電子技術(shù)有限公司。