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EB的危害及其實驗室安全使用預防措施

時間:2011/9/8閱讀:2111
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在電泳實驗或其他核酸分離實驗中,常用EB(Ethidium bromide,EtBr)作非放射性的Marker,來識別和顯示核酸條帶。EB是一種深紅色不易揮發(fā)的晶體,微溶于水。當被紫外線照射時能發(fā)出紅褐色的熒光。盡管EB是一種的顯色劑,但它的高危險性要求特殊的安全管理和回收流程。
 
人體危害 EB是一種強誘變劑(可能造成遺傳性危害),直接接觸有中等毒性。EB可以通過皮膚吸收,因此應當避免一切與EB的直接接觸。EB對皮膚,眼睛,口腔和上呼吸道系統(tǒng)有刺激性作用。應將EB安全密封,并密閉存放于干燥避光處。
安全預防措施 良好的操作習慣可以降低危害接觸。
在通風廚使用粉狀或結晶EB時,或使用含EB的溶液或片劑時,為避免吸入EB,應避免與EB的直接接觸。
為避免皮膚接觸到溶液中的EB,應戴手套、實驗服和防護鏡,并勤換手套。
要告知EB使用者EB的危險性、正確使用及回收方法。此外,經(jīng)培訓的才能通過實驗室化學衛(wèi)生管理計劃,獲得CHP(the laboratory’s Chemical Hygiene Plan)的證書。擁有該證書者才算是按標準操作使用EB。
在使用含EB類材料前需制訂一份EB安全使用說明。
進入工作區(qū)域需佩戴防護鏡并確認有可使用的洗眼及淋浴設施。
和其他化學藥品一樣,在EB的使用及放置房間內不準飲食。
使用后脫去手套及時洗手,*處理掉殘留的EB。
在使用UV照射EB時,戴上紫外線防護鏡或用紫外屏蔽玻璃以屏蔽。
緊急處理措施
誤入眼睛措施:如果EB不慎落入眼睛,立即用大量的冷水沖洗至少15分鐘。能用洗*進行擦洗。
誤接觸措施:如果皮膚不慎接觸到EB,立即脫去被污染的衣物。再用肥皂清洗接觸到的皮膚后,大量的冷水沖洗至少15分鐘。
誤服措施:如果不慎誤服或吸入EB,將受害者移至通風處,并及時送醫(yī)救治。
泄漏污染處理:如果EB不慎灑落在水槽或者下水道,請立刻告知相關管理部門。如果大量EB灑落,應立即通知在該工作域的所有人員,將人員疏散并開始清理被污染的區(qū)域。在未清理好現(xiàn)場的同時,應豎牌警告他人勿入。并為有關部門提供資料及協(xié)作。
若僅微量EB排入下水道并被及時發(fā)現(xiàn),在確保安全的情況下可由實驗室熟知EB危害的人員進行清理。當然,清理EB的人員是必須經(jīng)過安全培訓,并有防范意識和相應的處理裝置。如果實驗室的人員未經(jīng)培訓或沒有處理裝置,請相關部門進行處理。
凈化處理:在清理微量灑落的EB時,需全程穿著*(按上文所描述的“安全預防措施”)。用紫外燈照射確定污染的位置。EB的熒光是很容易看到的。如果灑落的EB是粉末狀,用濕紙巾擦拭后并按程序清理。如果灑落的是液體,用干紙巾吸干后再用UV光檢查殘余的EB,然后按程序清理。
當準備或使用除污劑時配戴全面防護裝備(實驗服、手套和防護鏡)。在用EB前,需預先準備好除污劑:4.2克*(NaNO2, CAS # 7362-00-0)和20毫升的次磷酸(50%) (H3PO2, CAS # 6303-21-5),加入300毫升水。
1)用紙巾蘸取去污劑擦洗被污染的區(qū)域,再用紙巾加自來水清洗5次,每次實用的紙巾都必須是干凈未污染的。
2)用紫外光檢查已清洗的區(qū)域,以確保所有EB被清除。必要時可重復步驟1。如果酸可能損害被污染的表面,可用適量自來水稀釋去污劑后再使用。
3)將所有使用過的紙巾用去污劑浸泡1小時,取出并將附著的去污劑擰干收回容器內。被處理時使用的手套和其他物件可雙層包裹再扔棄。
4)在去污劑的容器上標上EB去污劑,并注明成分。將去污使用過的物件打包,后續(xù)處理程序如下。
1 Lunn, G. & Sansone, E.B., Destruction of Hazardous Chemicals in the Laboratory, John Wiley & Sons, New York, 1990, p. 119-120.
在下表中明確了各類含EB廢液的處理方法。從管道排放EB溶液前,先用紫外燈照射是否還有熒光。如果仍有熒光,那該溶液仍需處理后才能從管道中排放。
1)過濾,用木炭顆粒過濾器或EB回收器。類似處理的裝置有Schleicher & Schuell 的EB回收系統(tǒng),以及EMD Biosciences的EB吸附器,這兩樣可在VWR公司購買到。或可適用Fluka的EB/SYBR®Green 清除劑,或Sigma的EB回收器,這兩個可在Sigma-Aldrich公司購買到。注意該產(chǎn)品的指示,不要超過回收器的能力。一旦超過它們的使用限度,過濾器或提取器必須經(jīng)生物安全處理后拋棄
2)吸收,現(xiàn)已有專門去除EB的“茶包”式產(chǎn)品,專門設計用于EB去污,如Qbiogene的GreenBag™ EB廢棄處理套件和Amresco的脫色袋。按照產(chǎn)品指示,確保有足夠的茶包吸收溶液中大量的EB。一旦已經(jīng)用盡,“茶包”必須經(jīng)相應部門安全處理后拋棄。
拋棄處理 將實驗室處理廢棄EB的方法和程序記錄下來,并整合到實驗室的標準作業(yè)程序中。關于不同類型的EB物品的處理方法,請參閱下表。
 
                廢棄EB處理指南

緩沖液 EB濃度較低
(< 0.5mg/L) 在排入下水道之前,緩沖液請先用過濾器或“茶包”處理。確定緩沖液中在紫外燈下無熒光方可下排。
儲備溶液,氯化銫溶液 EB濃度較高
( 1-10mg/mL) 濃度之高,使得處理EB的過濾和吸收方法都無法適用。將這些儲液交由相關部門專業(yè)人員處理。
處理用過的過濾器和“茶包” EB在(過濾/吸收過程)污染 將已用的過濾器和茶包明確標記。用過的過濾器和茶包交由相關部門處理。
凝膠 EB濃度低
( 3-5mg/L) 先將凝膠晾干,裝入的袋子中做好標記后,再交由相關部門處理。
污染的物件 手套,清理灑落EB用過的材料,以及實驗室中污染EB的物品 破碎的玻璃和銳器必須放入堅固的容器,其他材料可擺放整齊后裝入袋中做好標記,交由相關部門處理。
晶體及粉末 含有較純或濃縮過的EB 交由相關部門處理。
 
廢液
描述
廢棄處理方法
緩沖液
EB濃度較低
(< 0.5mg/L)
在排入下水道之前,緩沖液請先用過濾器或“茶包”處理。確定緩沖液中在紫外燈下無熒光方可下排。
儲備溶液,氯化銫溶液
EB濃度較高
( 1-10mg/mL)
濃度之高,使得處理EB的過濾和吸收方法都無法適用。將這些儲液交由相關部門專業(yè)人員處理。
處理用過的過濾器和“茶包”
EB在(過濾/吸收過程)污染
將已用的過濾器和茶包明確標記。用過的過濾器和茶包交由相關部門處理。
凝膠
EB濃度低
( 3-5mg/L)
先將凝膠晾干,裝入的袋子中做好標記后,再交由相關部門處理。
污染的物件
手套,清理灑落EB用過的材料,以及實驗室中污染EB的物品
破碎的玻璃和銳器必須放入堅固的容器,其他材料可擺放整齊后裝入袋中做好標記,交由相關部門處理。
晶體及粉末
含有較純或濃縮過的EB
交由相關部門處理。
廢液
描述
廢棄處理方法
緩沖液
EB濃度較低
(< 0.5mg/L)
在排入下水道之前,緩沖液請先用過濾器或“茶包”處理。確定緩沖液中在紫外燈下無熒光方可下排。
儲備溶液,氯化銫溶液
EB濃度較高
( 1-10mg/mL)
濃度之高,使得處理EB的過濾和吸收方法都無法適用。將這些儲液交由相關部門專業(yè)人員處理。
處理用過的過濾器和“茶包”
EB在(過濾/吸收過程)污染
將已用的過濾器和茶包明確標記。用過的過濾器和茶包交由相關部門處理。
凝膠
EB濃度低
( 3-5mg/L)
先將凝膠晾干,裝入的袋子中做好標記后,再交由相關部門處理。
污染的物件
手套,清理灑落EB用過的材料,以及實驗室中污染EB的物品
破碎的玻璃和銳器必須放入堅固的容器,其他材料可擺放整齊后裝入袋中做好標記,交由相關部門處理。
晶體及粉末
含有較純或濃縮過的EB
交由相關部門處理。
 
有效處理后的廢液,再確保檢測不到EB后方可排入下水道(核實熒光)。
 
 
處理EB的其他方法 可改用低毒性的其他材料來替代EB( 例如,可用SYBR SafeTM 對DNA凝膠染色),以減少在實驗室里可能發(fā)生的危險。


 

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