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上海百蕊生物科技有限公司
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GENOMIC小鼠Ⅰ型膠原C端肽(CTX-Ⅰ)試劑盒介紹

時間:2014-7-28閱讀:278
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GENOMIC品牌專業生產ELISA試劑盒,由于采用完整的德國生產工藝和*的抗體,其試劑盒具有以下幾個方面的特點:

一、、靈敏、特異的抗體;

二、穩定的重復性和可靠性;

三、吸附性能好,空白值低,孔底透明度高的固相載體;

四、適用血清、血漿、組織勻漿液、細胞培養上清液、尿液等等多種標本類型;

五、性價比非常好,節省實驗經費。

 

本試劑盒用于測定小鼠血清、血漿及相關液體樣本中Ⅰ型膠原C端肽(CTX-Ⅰ)含量

實驗原理

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本小鼠Ⅰ型膠原C端肽(CTX-Ⅰ)水平。用純化的小鼠Ⅰ型膠原C端肽(CTX-Ⅰ)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入Ⅰ型膠原C端肽(CTX-Ⅰ),再與HRP標記的Ⅰ型膠原C端肽(CTX-Ⅰ)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過*洗滌后底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的Ⅰ型膠原C端肽(CTX-Ⅰ)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品小鼠Ⅰ型膠原C端肽(CTX-Ⅰ)濃度。 

試劑盒組成 

1

30倍濃縮洗滌液

20ml×1瓶

7

終止液

6ml×1瓶

2

酶標試劑

6ml×1瓶

8

標準品(48 nmol/L)

0.5ml×1瓶

3

標包被

12孔×8條

9

標準品稀釋液

1.5ml×1瓶

4

樣品稀釋液

6ml×1瓶

10

說明書

1份

5

顯色劑A液

6ml×1瓶

11

封板膜

2張  

6

顯色劑B液

6ml×1/瓶

12

密封袋

1個

標本要求 

1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但避免反復凍融

2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

操作步驟

  • 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

24 nmol/L

5號標準品

150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液

12 nmol/L

4號標準品

150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液

6 nmol/L

3號標準品

150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液

3 nmol/L

2號標準品

150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液

1.5 nmol/L

1號標準品

150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液

 

 

  • 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻
  • 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   
  • 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
  • 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
  • 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。 
  • 溫育:操作同3。
  • 洗滌:操作同5。
  • 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
  • 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)
  • 測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值) 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

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