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大鼠抗髓鞘相關糖蛋白抗體(MAG Ab)ELISA試劑盒實驗指導,實驗咨詢,售后保障

時間:2014-6-4閱讀:125
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大鼠抗髓鞘相關糖蛋白抗體(MAG Ab)ELISA試劑盒是一種利用雙抗體夾心法測定標本中大鼠白介素6含量的科研試劑盒。上海百蕊生物科技有限公司專業(yè)銷售 elisa檢測試劑盒,質(zhì)量可靠,價格低廉。我們所銷售的大鼠白介素6Elisa試劑盒,具有度高于市場同類產(chǎn)品,性價比在市場上具有很強的優(yōu)勢,如果產(chǎn)品有質(zhì)量問題,免費包退換。歡迎廣大師生朋友訂購,  或者 14721017287,:

 

 用于ELISA測定的臨床標本zui為常用的是血清(漿)其次為唾液、腦脊液、尿液、糞便等標本。血清標本測定的標志物為傳染性病原體的抗原和抗體、腫瘤標志物、特種蛋白時,在處理和保存方面要考慮以下幾個方面:1)要注意避免出現(xiàn)嚴重溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團,其有類似過氧化物的活性,故在以HRP為標記酶的ELISA 測定中,如血清標本中血紅蛋白濃度較高,則很容易在溫育過程中吸附于固相,從而與后面加入的HRP底物反應顯色[1]。2)樣本的采集及血清分離中要注意避免細菌污染。細菌生長分泌的一些酶可能會對抗原抗體等蛋白產(chǎn)生分解作用;此外一些細菌的內(nèi)源性酶如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶本身會對用相應酶作標記的測定方法產(chǎn)生非特異性干擾。3)血清標本如是以無菌操作分離,則可在2~8℃下保存1周。如為有菌操作,則建議冰凍保存。樣本的長時間保存應在- 70℃以下。4)冰凍保存的血清標本須注意避免因停電等造成的反復凍融。標本的反復凍融所產(chǎn)生的機械剪切力將對標本中的蛋白等分子產(chǎn)生破壞作用,從而引起假陰性結果。此外凍融標本的混勻亦應注意,不要進行劇烈振蕩,反復顛倒混勻即可。5)標本在保存中如出現(xiàn)細菌污染所致的混濁或絮狀物時,應離心沉淀后取上清檢測。對用于激素和治療藥物測定的血清標本的收集,要注意收集時間對測定結果產(chǎn)生影響。

 

實驗時通常將試劑從冰箱中拿出來即用,而忽略了這種做法有可能影響后面溫育時間不夠的問題,其直接的后果是對一些弱陽性標本的檢測出現(xiàn)假陰性。因此在ELISA測定中試劑準備zui關鍵的是,在實驗開始前,將試劑盒先從冰箱中拿出來,在室溫下放置20分鐘以上后,再進行測定。以使試劑盒在使用前與室溫平衡。其目的是在后面的溫育反應步驟中,使反應微孔內(nèi)的溫度能較快地達到所要求的高度,以滿足測定要求。其次,目前的商品ELISA試劑盒中的洗板液均需在實驗室使用時對所提供的濃縮液稀釋配制,因此稀釋時所用的蒸餾水或去離子水應保證質(zhì)量。此外,當試劑盒以OPD為底物時,則底物溶液應在反應顯色前臨時配制。

    在現(xiàn)在的ELISA商品試劑盒中,血清樣本的加入幾乎是*的要使用微量加樣器加入樣本的步驟。使用微量加樣器加樣必須注意避免以下幾點:加樣太快,無法保證微量加樣的準確性和均一性。加在孔壁上部的非包被區(qū),易導致非特異吸附。濺出會對鄰近孔產(chǎn)生污染。出現(xiàn)氣泡則反應液界面有差異。試劑的加入除了要注意滴加的角度外,滴加的速度也很重要。滴加太快易出現(xiàn)重復滴加或加在兩孔之間的現(xiàn)象,這樣就會在孔內(nèi)的非包被區(qū)出現(xiàn)非特異吸附,從而引起非特異顯色。故有時一份標本用相同的試劑盒兩次測定結果不同,往往是上述加樣及試劑的錯誤所致。

       溫育是ELISA測定中zui容易出現(xiàn)問題的步驟。ELISA作為一種固相免疫測定,必須在一定的溫度條件下反應一定的時間,且溫育所需時間與溫度成負相關性。zui為常用的溫育溫度有37℃和室溫,其次是43℃和2~8℃。 目前ELISA商品試劑盒,國產(chǎn)反應溫育時間為37℃ 30分鐘~1小時,進口試劑盒為37℃ 1~2小時才能較*的結合。溫育實際測定操作中要注意以下幾點:1)要保證在設定的溫度下有足夠的反應時間。在臨床實驗室中,通有將微孔板一放入溫箱即開始計時,造成實際測定中溫育時間不夠,弱陽性樣本測不出來 。南方冬季室內(nèi)溫度較低應特別注意,此時微孔板轉入溫箱后37℃溫育時間不夠,以致弱陽性樣本測定為陰性[3]。為保證37℃下足夠的溫育時間,可自行確定本實驗室不同季節(jié)(不同室溫下)微孔板從室溫拿至溫箱所需時間孔內(nèi)溫度才能達到37℃,用一小溫度計放置板孔反應溶液中測量觀察即可。2)溫育溫度的選擇。在有的ELISA試劑盒的說明書中,指出溫育溫度可有兩種。從免疫測定的抗原抗體反應的本質(zhì)來看,在較低的溫度下反應較長的時間zui為*。建議在臨床ELISA測定中盡量使用較低溫育溫度較長反應時間的條件。3)“邊緣效應”的排除。“邊緣效應”指外周孔顯色較中心孔深,原因為96孔板周孔與中心孔表面熱力學梯度不同。使用水浴或在將反應溶液加入至板孔中時,將板和溶液均加熱至溫育溫度(如37℃),就可排除“邊緣效應”,且可提高測定重復性。
    總而言之,盡量采用水浴,溫育中讓微孔板浮于水面上,或?qū)⒔杆纳巢挤湃胍淮箫埡兄谐梢粷窈校庞跍叵渲小_@樣因板條孔底部直接與37℃水或濕布的接觸,水浴箱或濕盒內(nèi)的高溫度使反應溶液的溫度迅速與溫室平衡。

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