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上海百蕊生物科技有限公司
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*親和素酶聯免疫吸附試驗(BAS-ELISA)

時間:2012-2-7閱讀:3174
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 *親和素(又稱抗*)系統(biotinavidin system,BAS)標記抗體的技術是20世紀70年代后期發展起來的一種新的免疫檢測方法。由于親和素與*間的親和力*,結合迅速,且極其穩定,*標記抗體和酶的標記率高,又不影響蛋白的活性,使BAS標記技術比常規酶聯免疫、放射免疫及熒光免疫技術有著更高的靈敏度,為微量抗原、抗體的檢測開辟了新的途徑。目前*和親和素(近年來,在BAS檢測中多用鏈霉親和素“streptavidin,SA”,它是鏈霉菌培養過程中的分泌物,完整的鏈霉親和素和從卵白中提取的親和素一樣,也由4條相同的肽鏈組成。因鏈霉親和素在檢測應用中發生的非特異性結合遠較親和素低,因此日漸受重視,已有取代親和素之勢),

各種抗體或酶的標記物在國內已有商品供應,使用方便。BASELISA具有的特點:
①對于所有的抗原抗體系統,包括免疫細胞化學、ELISA、免疫印跡法等都適用,應用范圍極廣;
②BAS在溫和條件下可與各類生物大分子如蛋白質、脂多糖等結合,并且這種結合對原生物大分子的生物活性無影響;
③每個親和素分子可與4個*分子結合,所以可以偶合更多連接*的酶分子,從而大大提高了靈敏度;
④*和親和素間親和力強,故二者一旦結合,就極為穩定,不受在ELISA方法中的保溫及多次洗滌影響,而且這種結合反應時間比抗原抗體反應所需時間短;
⑤結果專一性強,非特異性顯色或染色背景極低;
⑥*抗體稀釋度高,可節約抗體。

原理
*或親和素與抗體分子或標記物結合后,既不影響前者的親和力,也不改變后者的特性。親和素分子的4個活性部位并非都和連接在抗體分子上的*殘基結合,剩下的游離部位尚可作為另一種*標記蛋白質的受體。這些特點就是BAS免疫標記技術的基礎和原理。
BAS基本檢測方法可分為兩大類,一類以游離親和素居中,分別連接*化大分子反應體系和標記*,稱為BAB法或橋聯親和素*法(bridged avidin biotin technique,BRAB),其改良法稱為(avidinbiotin complex,ABC)法。另一類以標記親和素連接*化大分子反應體系,稱為BA法或標記

親和素和*法(LAB)。現分別介紹如下:
1 BA法亦稱LBA法。系將特異性抗體*化,將酶分子標記在親和素分子上,*化抗體與被檢抗原結合后,再借BAS的高度親和力將酶分子聯結到抗原分子上,經酶促反應即可檢出抗原。
2 BAB法亦稱BRAB法。系將特異性抗體*化,將酶分子標在*上,然后以游離親和素橋聯物,使被檢抗原、*化抗體和酶標*聯成一體。
3 ABC法原理與BAB法基本相同,只是親和素和酶標*需要先按一定比例形成ABC復合物,這種網絡結構結合了大量的酶分子,當親和素尚未被酶標*飽和時,*化抗體即可與之結合。BASELISA的三種基本檢測法。

上述方法中,如將第二抗體*化,即為間接法,見表341。由于間接法增加了一級抗原抗體反應,因而比直接法更敏感,應用范圍更廣。近年來許多學者對上述基本方法進行了改良,有人用親和素抗體或A蛋白作橋聯物。另外還發展了BAELISA競爭法和抑制法等。

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