小鼠生長激素（GH）ELISA試劑盒檢測(cè)生長激素缺乏癥相關(guān)表達(dá)和對(duì)免疫的影響

生長激素缺乏癥(GHD)是指生長激素分泌功能障礙所致的生長遲緩,是一種嚴(yán)重影響兒童青少年身心健康的疾病.據(jù)報(bào)道患病率大約是1/4000~1/15000.GHD的病因可劃分為特發(fā)性和器質(zhì)性兩種.隨著內(nèi)分泌診斷技術(shù)和影像學(xué)檢查技術(shù)的高速發(fā)展,對(duì)GHD病因的認(rèn)識(shí)也逐漸發(fā)生了變化,主要提出了兩種假說,即所謂"損傷學(xué)說"和"發(fā)育異常學(xué)說".該研究的目的在于分析GHD的病因譜,分析這些病因?qū)ο虑鹉X垂體結(jié)構(gòu)的影響作用以及與臨床表現(xiàn)的關(guān)系,分析基因異常在GHD發(fā)病機(jī)制中的作用.GHD的病因多種多樣,具有一定的異質(zhì)性.除少數(shù)是有明確的器質(zhì)性中樞神經(jīng)系統(tǒng)病變外,絕大多數(shù)為特發(fā)性.特發(fā)性GHD中,圍產(chǎn)期異常是重要的致下丘腦垂體損傷的原因,但不能除外其它因素的作用,如胚胎發(fā)育過程中的異常等.圍產(chǎn)期異常可能是通過造成垂體柄斷裂來影響垂體的多種內(nèi)分泌功能.在特發(fā)性的GHD中,極少數(shù)病例是由于GH-N基因異常而造成的.因此對(duì)于GHD的病因的研究有待于進(jìn)一步的深入,特別是對(duì)于下丘腦垂體的胚胎發(fā)育的調(diào)控基因/因子,如Pit-1轉(zhuǎn)錄因子等進(jìn)行研究.

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人生長激素(human growth hormone,hGH)基因在小鼠體內(nèi)的表達(dá)和持續(xù)時(shí)間以及表達(dá)的生長激素對(duì)小鼠血清中IL-2、IFN-γ和TNF-α濃度的影響.方法 1.構(gòu)建真核細(xì)胞高表達(dá)hGH基因的重組質(zhì)粒pcDNA3-hGH,并對(duì)所構(gòu)建的重組質(zhì)粒進(jìn)行內(nèi)切酶圖譜鑒定和序列分析.2.通過脂質(zhì)體介導(dǎo)將含hGH的重組質(zhì)粒pcDNA3-hGH轉(zhuǎn)染入COS-1細(xì)胞中,通過免疫組化和ELISA的方法對(duì)COS-1細(xì)胞和培養(yǎng)上清中的hGH進(jìn)行了觀察,并用Jurkat細(xì)胞增殖法檢測(cè)重組質(zhì)粒表達(dá)蛋白的生物學(xué)活性.3.將重組質(zhì)粒pcDNA3-hGH直接注射于小鼠股四頭肌中,于注射后第5、15、25、40、60天從眼眶取血,分離血清,用ELISA方法檢測(cè)血清中GH、IL-2、IFN-γ和TNF-α的水平;同時(shí)取注射處的骨骼肌組織進(jìn)行免疫組化染色以鑒定hGH的表達(dá).