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上海百蕊生物科技有限公司
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上海百蕊為大家提供:WB實驗的詳細操作步驟

時間:2015-5-26閱讀:1598
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蛋白定量

標準曲線的繪制:取一塊酶標板,按照下表加入試劑

孔號

1

2

3

4

5

6

7

8

蛋白標準液(μl

0

2

4

6

8

12

16

20

去離子水(μl

20

18

16

14

12

8

4

0

蛋白濃度(μg/μl

0

0.05

0.1

0.15

0.2

0.3

0.4

0.5

2. 根據樣品數量,將BCA試劑A與試劑B按體積比為50:1配制適量BCA工作液,充分混勻;

3. 各孔加入160μl BCA工作液;

4. 把酶標板放在振蕩器上振蕩30sec37℃放置30分鐘,然后在562nm下測定吸光度。以吸光值為橫坐標,蛋白濃度(μg/μl)為縱坐標,繪出標準曲線;

5. 在酶標板中加入2μl待測蛋白和18μPBS(稀釋10倍),加入160μl BCA工作液把酶標板放在振蕩器上振蕩30sec37℃放置30分鐘,然后在562nm下測定吸光度

6. 根據所測樣品的吸光值,在標準曲線上即可查得相應的蛋白濃度(μg/μl,乘以樣品稀釋倍數(10)即為樣品實際濃度(單位:μg /μl)。


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