蛋白定量
1 標準曲線的繪制:取一塊酶標板,按照下表加入試劑
孔號 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 |
蛋白標準液(μl) | 0 | 2 | 4 | 6 | 8 | 12 | 16 | 20 |
去離子水(μl) | 20 | 18 | 16 | 14 | 12 | 8 | 4 | 0 |
蛋白濃度(μg/μl) | 0 | 0.05 | 0.1 | 0.15 | 0.2 | 0.3 | 0.4 | 0.5 |
2. 根據樣品數量,將BCA試劑A與試劑B按體積比為50:1配制適量BCA工作液,充分混勻;
3. 各孔加入160μl BCA工作液;
4. 把酶標板放在振蕩器上振蕩30sec,37℃放置30分鐘,然后在562nm下測定吸光度。以吸光值為橫坐標,蛋白濃度(μg/μl)為縱坐標,繪出標準曲線;
5. 在酶標板中加入2μl待測蛋白和18μl PBS(稀釋10倍),加入160μl BCA工作液,把酶標板放在振蕩器上振蕩30sec,37℃放置30分鐘,然后在562nm下測定吸光度。
6. 根據所測樣品的吸光值,在標準曲線上即可查得相應的蛋白濃度(μg/μl),乘以樣品稀釋倍數(10)即為樣品實際濃度(單位:μg /μl)。
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