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水蛭素(HR)基因蛋白聯免疫分析(ELISA)試劑盒

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水蛭素(HR)基因蛋白聯免疫分析(ELISA
試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用。
藥品名稱:
通用名:水蛭素(HR基因蛋白聯免疫分析試劑盒
使用目的:
本試劑盒用于測定相關液體樣本中水蛭素(HR含量。
實驗原理
本試劑盒應用間接法測定標本中水蛭素(HR基因蛋白水平。用純化的水蛭素(HR)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入已知濃度的水蛭素(HR)標準品和未知濃度的水蛭素(HR)待檢樣品,溫育后,加入*標記的抗IgG抗體,再與鏈霉親和素-HRP結合,形成免疫復合物,經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMBHRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的水蛭素(HR)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中水蛭素(HR)濃度。
試劑盒組成

1
20倍濃縮洗滌液
50ml×1
 
 
9
標準品S160ng/L
0.5ml×1
2
鏈霉親和素-HRP
6ml×1
標準品S240ng/L
0.5ml×1
3
酶標包被板
12孔×8
標準品S320ng/L
0.5ml×1
4
*標記的抗-IgG抗體
6ml×1
標準品S410ng/L
0.5ml×1
5
顯色劑A
6ml×1
標準品S55ng/L
0.5ml×1 
6
顯色劑B
6ml×1/
10
密封袋
1
7
終止液
6ml×1
11
封板膜
3
8
樣品稀釋液
6ml×1
12
說明書
1

 
標本要求
1.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
2.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融
操作步驟
1.       根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定,能使用復孔的盡量做復孔。
2.       加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品,其余各步操作相同)、標準品孔、待測樣品孔。然后在標準品孔中加入標準品50μl,在樣本反應孔中先加入待測樣品10μl再加入樣品稀釋液40μl(樣品zui終稀釋度為5倍),蓋上封板膜,輕輕振蕩混勻,37溫育45分鐘。
3.       配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
4.       洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復4次,拍干。
5.       加*標記的抗-IgG抗體:每孔加入*標記的抗-IgG抗體50μl。37℃溫育30分鐘
6.       洗滌:操作同4。
7.       加鏈霉親和素-HRP:每孔加入50μl的鏈酶親和素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。
8.       洗滌:操作同4。
9.       顯色:每孔先加入顯色劑A 50μl,再加入顯色劑B 50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10.   終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
11.   測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。
 
計算
  以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值待入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度。
注意事項
1.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。
3.各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。
4. 如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值),請先將樣本稀釋一定倍數(n倍)后再測定,計算時請zui后乘以稀釋倍數(×5×n)。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.本試劑不同批號組分不得混用。顯色劑B請避光保存。
7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準。
線形范圍:
2ng/L -70ng/L
規格:
96人份/盒
保存條件及有效期
1.試劑盒保存:;2-8
2.有效期:6個月
 
 

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