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巨噬細胞和淋巴細胞非特異性酯酶染色的方法

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非特異性酯酶
一固定液 甲醛-丙酮緩沖液(PH=6.6)
Na2HPO4 20mg,12 , 50.39mg
KH2PO4 100mg
dH2O 30ml
丙酮 45ml
40%甲醛 25ml

固定血細胞用

二孵育液4%
1.付品紅 4g
2N鹽酸 100ml將付品紅加入到2n鹽酸中,水浴溶解過濾后,置4℃,保存備用
2.4%*液
* 400mg
蒸餾水 10ml
3.六偶氮付品紅溶液
臨用前取4%*溶液3ml,邊搖邊滴入3ml付品紅中,再充分震蕩,1min備用
4.2%α醋酸萘酯溶液:取2gα醋酸萘酯溶于100ml乙二醇甲醚中,置4℃冰箱,避光保存備用
5.M/15PH7.6磷酸緩沖液
甲液:KH2PO49.08g溶于1000ml蒸餾水,乙液Na2HPO49.47g溶于1000ml蒸餾水 12H2O,23.882
取甲液13ml,乙液87ml,混合即可
KH2PO40.59g,Na2HPO412H2O 10.39g-500ml
孵育液臨用前配制:取m/15,PH=7.6緩沖液89ml,逐滴加入六偶氮付品紅液6ml,充分混合后,再滴入2%醋酸萘酯2.5ml,充分混合后調整pH至5.8-6.4

以下石蠟切片,冰凍切片可以用4%多聚甲醛固定,先固定與切片后固定均可

二石蠟切片
1. 將被檢組織置于4℃10%中性甲醛鈣溶液中固定,過夜
2. 移入4℃holt氏阿拉伯膠糖液至少24hr
3. 置于4℃50%丙酮1hr
4. 轉入4℃丙酮24hr(換兩次),zui后一次留在室溫約1-2hr
5. 在二甲苯 中透明30min(換兩次)
6. 56℃浸蠟30-45min
7. 切片 置于室溫或37℃溫箱干燥1-2hr。
8. 二甲苯脫蠟,經丙酮,50%丙酮各2-3min,然后進入蒸餾水
9. 孵育后步驟與血涂片同,但需經50%丙酮及純丙酮各30s-1min,二甲苯 透明,然后封藏

holt氏阿拉伯膠蔗糖液
蔗糖30g
阿拉伯膠1g
100ml

用這個酶擴散少些。

1%甲基綠染色液

用于復染
 

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