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大鼠降鈣素基因相關肽(CGRP)酶聯免疫分析(ELISA)試劑盒使用說明書

時間:2010-10-20閱讀:184
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大鼠降鈣素基因相關肽(CGRP)酶聯免疫分析(ELISA)
試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用。
藥品名稱:
通用名:大鼠降鈣素基因相關肽(CGRP)酶聯免疫分析試劑盒
使用目的:
本試劑盒用于測定大鼠血清、血漿、或相關組織液中降鈣素基因相關肽(CGRP)的含量。
實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠降鈣素基因相關肽(CGRP)水平。用純化的
大鼠降鈣素基因相關肽(CGRP)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中加入
降鈣素基因相關肽(CGRP),再與 HRP標記的 CGRP 抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復
合物,經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的
作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的降鈣素基因相關肽(CGRP)呈正相關。用
酶標儀在 450nm波長下測定吸光度(OD 值),通過標準曲線計算樣品中大鼠降鈣素基因相
關肽(CGRP)的含量。
試劑盒組成
1 20 倍濃縮洗滌液 50ml×1 瓶 7 終止液 6ml×1 瓶
2 酶標試劑 6ml×1 瓶 8 標準品(45ng/L) 0.5ml×1 瓶
3 酶標包被板 12 孔×8 條 9 標準品稀釋液 1.5ml×1 瓶
4 樣品稀釋液 6ml×1 瓶 10 說明書 1 份
5 顯色劑A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 張  
6 顯色劑B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 個
標本處理及要求
1.血清、血漿標本可直接測定;
2.不能檢測含NaN3的樣品,因 NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
3.采集后盡早進行實驗,若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反
復凍融。
操作步驟
1. 標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上按序設標準品孔 10 孔,在*、第二孔中分別
加標準品 100μl,然后在*、第二孔中加標準品稀釋液 50μl,混勻;再各取 100μl 分
別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液 50μl,混勻后,在第
三孔和第四孔中先各取50μl棄掉;再各取 50μl分別加到第五、第六孔中;再在第五、
第六孔中分別加標準品稀釋液 50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取 50μl 分別加
到第七、第八孔中;再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液 50μl,混勻后從第七、
第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中;再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,
混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。( 稀釋后各孔加樣量都為 50μl,濃 度分別為  30                 
ng/L,20 ng/L ,10 ng/L,5 ng/L,2.5 ng/L)。
2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣
品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5 倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,輕輕晃動混勻。
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。    
4. 配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此
重復 5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同 3。
8. 洗滌:操作同 5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑 A50μl,再加入顯色劑 B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色
15 分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
11. 測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止
液后 15分鐘以內進行。
計算
以標準物的濃度為橫坐標,OD 值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的
OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標
準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,
即為樣品的實際濃度。
注意事項
1.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未
用完,板條應裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。
3.各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間
控制在5 分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。
4.請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值
大于標準品孔*孔OD值的),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n 倍)后再測定,計
算時請zui后乘以總稀釋倍數(×n×5)。
5.嚴格按說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
6.本試劑不同批號組分不得混用。
7.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9.底物請避光保存。
檢測范圍:
2 ng/L -40 ng/L
規格:
96 人份/盒
保存條件及有效期
1.試劑盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6個月

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