動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)罐分類(lèi)

1、攪拌式動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)罐

　　攪拌式培養(yǎng)罐靠攪拌槳提供液相攪拌的動(dòng)力，它有較大的操作范圍、良好的混合性和濃度均勻性，因此在生物反應(yīng)中被廣泛使用。但由于動(dòng)物細(xì)胞沒(méi)有細(xì)胞壁的保護(hù)，因此對(duì)剪切作用十分敏感，直接的機(jī)械攪拌很容易對(duì)其造成損害，傳統(tǒng)的用于微生物的攪拌培養(yǎng)罐用作動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)顯然是不合適的。所以，動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)中的攪拌式培養(yǎng)罐都是經(jīng)過(guò)改進(jìn)的，包括改進(jìn)供氧方式、攪拌槳的形式及在培養(yǎng)罐內(nèi)加裝輔件等。

　　（1）供氧方式的改進(jìn)

　　一般情況下攪拌式培養(yǎng)罐還常伴有鼓泡，為細(xì)胞生長(zhǎng)提供所需氧分。由于動(dòng)物細(xì)胞對(duì)鼓泡的剪胞生長(zhǎng)提供所需氧分。由于動(dòng)物細(xì)胞對(duì)鼓泡的剪切也很敏感，所以人們?cè)诠┭醴绞降母倪M(jìn)上做了許多工作。籠式供氧是攪拌式動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)罐供氧方式的一種，即氣泡用絲網(wǎng)隔開(kāi)，不與細(xì)胞直接接觸。培養(yǎng)罐既能保證混合效果又有盡可能小的剪切力，以滿足細(xì)胞生長(zhǎng)的要求。北野昭一報(bào)道了一個(gè)經(jīng)過(guò)改進(jìn)的攪拌式動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)罐，整體呈梨形，攪拌置于培養(yǎng)罐底部，在攪拌軸外裝了一個(gè)錐形不銹鋼絲網(wǎng)與攪拌軸一起轉(zhuǎn)動(dòng)。軸心處的鼓泡管在絲網(wǎng)內(nèi)側(cè)鼓泡，絲網(wǎng)外側(cè)的細(xì)胞不與氣泡直接接觸。

　　（2）攪拌槳的改進(jìn)

　　攪拌槳的形式對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響非常大，這方面的改進(jìn)主要考慮如何減小細(xì)胞所受的剪切力。有人對(duì)攪拌槳的形式作了改進(jìn)，并在反應(yīng)器內(nèi)加裝了輔件，實(shí)驗(yàn)證明改進(jìn)后的反應(yīng)器適用于對(duì)剪切力敏感的細(xì)胞進(jìn)行高密度培養(yǎng)。反應(yīng)器采用了一個(gè)雙螺旋帶狀攪拌槳，頂部的法蘭蓋上安裝了3塊表面擋板。每塊擋板相對(duì)于徑向的夾角為30°，垂直插入液面。擋板的存在減小了液面上的旋渦。這個(gè)反應(yīng)器維持了較小的剪切力，實(shí)驗(yàn)中用于昆蟲(chóng)細(xì)胞的培養(yǎng)，zui終的培養(yǎng)密度達(dá)到6×106個(gè)/mL，成活率在98%以上。

　　2、非攪拌式動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)罐

　　攪拌式細(xì)胞培養(yǎng)罐用于動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)存在的zui大缺點(diǎn)是剪切力大，容易損傷細(xì)胞，雖然經(jīng)過(guò)各種改進(jìn)，這個(gè)問(wèn)題仍很難避免。相比之下，非攪拌式培養(yǎng)罐產(chǎn)生的剪切力較小，在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)中表現(xiàn)出了較強(qiáng)的優(yōu)勢(shì)。

　　（1）填充床反應(yīng)器填充是在反應(yīng)器中填充一定材質(zhì)的填充物，供細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)。營(yíng)養(yǎng)液通過(guò)循環(huán)灌流的方式提供，并可在循環(huán)過(guò)程中不斷補(bǔ)充。細(xì)胞生長(zhǎng)所需的氧分也可以在反應(yīng)器外通過(guò)循環(huán)的營(yíng)養(yǎng)液攜帶，因而不會(huì)有氣泡傷及細(xì)胞。這類(lèi)反應(yīng)器剪切力小，適合細(xì)胞高密度生長(zhǎng)。

　　（2）中空纖維反應(yīng)器中空纖維培養(yǎng)罐由于剪切力小而廣泛用于動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)。這類(lèi)培養(yǎng)罐由中空纖維管組成，每根中空纖維管的內(nèi)徑約為200μm，壁厚為50～70μm。管壁是多孔膜，O2和CO2等小分子可以自由透過(guò)膜擴(kuò)散，動(dòng)物細(xì)胞貼附在中空纖維管外壁生長(zhǎng)，可以很方便地獲取氧分。

　　（3）氣升式細(xì)胞培養(yǎng)罐氣升式生物反應(yīng)器（airliftbioreactor）也是實(shí)現(xiàn)動(dòng)物細(xì)胞高密度培養(yǎng)的常用設(shè)備之一，其特點(diǎn)是結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，操作方便。有人在氣升式反應(yīng)器中利用微載體培養(yǎng)技術(shù)，研究了Vero細(xì)胞高密度培養(yǎng)的工藝條件。證明氣升式反應(yīng)器中懸浮微載體培養(yǎng)Vero細(xì)胞，在加入適量保護(hù)劑、營(yíng)養(yǎng)供應(yīng)充足的情況下，細(xì)胞可以正常生長(zhǎng)至長(zhǎng)滿微載體表面，終密度可達(dá)1.13×106個(gè)/mL。