免疫印跡法檢測人類免疫缺陷病毒

[測定方法] 免疫印跡法（或蛋白印跡法）
[方法學原理] 將純化的確診HIV蛋白抗原裂解，然后通過SDS-PAGE按分子量大小將其分離，再轉印至硝酸纖維素薄膜上，并保存于4℃干燥試管內，測定時將割成膜條的硝酸纖維素薄膜與待檢樣品反應，使其充分接觸。若樣品中含有HIV抗體，將會與膜條上的抗原區帶結合，再加上酶標抗人IgG抗體，經過與底物反應顯色，即可形成肉眼可見的不同區帶。
[標本準備] 靜脈抽血2ml，不抗凝。
[試劑]
1．轉印有HIV I型和Ⅱ型抗原的硝酸纖維素薄膜
2．酶聯結合物
3．底物及底物緩沖液
4．洗滌液
5．穩定液
[測定步驟]
1．在免疫印跡法反應槽內，加入3ml洗滌液。加入待測樣品ul，混勻。
2．在反應槽內加入含HIV抗原的硝酸纖維素薄膜液，在室溫環境中振搖2h，每份樣品為l條。每次測定需附陰性對照、陽性對照。在振搖過程中，應使膜條帶有號碼的一面始終保持向上。
3．傾去槽內的反應液，用洗滌液將各膜條洗5次，每次3min。
4．在各反應槽內加酶聯試劑，于室溫環境中再振搖lh，用洗滌液洗4次，zui后用底物緩沖液洗1次。
5．將底物溶液配好后，加入反應槽內并振搖數分鐘，待陽性對照出現典型的HIV抗體陽性區帶后，迅速傾去底物溶液，并加入穩定液繼續振搖30min。然后將膜條取出，避光晾干，判斷結果。
6．結果判斷：確認試驗的結果判定可根據世界衛生組織推薦的標準，即陽性至少1條env帶和1條pol帶；或至少1條env帶和1條、gag帶；或至少1條env帶、1條gag帶和1條pol帶；或至少2條env帶；陰性：無病毒特異帶。可疑：1條gag帶和1條pol帶，或只有gag帶或poi帶。
[臨床意義] 免疫印跡法是目前*的確診HIV感染的方法，若檢出3個HIV主要基因（gag、poi、env）產物的抗體為陽性時，可確診為HIV感染。