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上海百蕊生物科技有限公司
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大鼠白介素2elisa試劑盒對胰島移植大鼠長期存活效果的研究

時間:2015/8/12閱讀:298
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胰島移植長期以來被認為是治療Ⅰ型糖尿病的一種頗具吸引力的療法,并具有相當的優勢。為了研究胰島移植中tacrolimus,rapamycin和AntiIL-2antibody在嚙齒類動物之間防止排斥反應的機理和現象,本課題選用Wistar大鼠為胰島移植物的供體,C57BL/6(B6)作為移植受體,移植物經分離和純化后被移植入受體大鼠的腎包膜下,為了更好的模擬臨床胰島移植的效果,根據EdmontonProtocol方案進行用藥。

大鼠被隨機的分為5組,依次是:control組,tacrolimus+rapamycin組,tacrolimus+AntiIL-2antibody組,rapamycin+AntiIL-2antibody組,tacrolimus+rapamycin+AntiIL-2antibody組. 

實驗方法:供體胰島分離和純化采用Wistar大鼠進行,胰腺組織經膠原酶P消化,通過Ficoll梯度離心分離純化之后,在37℃(98.6°F),5%的二氧化碳溫箱中孵育不超過2小時,將分離純化后的胰島細胞移植入C57BL/6(B6)受者大鼠腎包膜下,每只大鼠移植300-400個胰島為宜。移植后每周三次對各組大鼠應用*進行尾靜脈采血,測量血糖,每周三次,連續100天受體血糖水平不超過18mmol/L,即為長期存活。組織學檢查:于胰島細胞移植第10天和第105天大鼠腎臟做病理切片,10%甲醛包埋,石蠟包埋,蘇木精-伊紅染色,鏡下觀察組織學變化。糖耐量試驗:術后兩周,進行糖耐量試驗,所有受體B6大鼠均給予20%葡萄糖(1g/kg體重)腹腔內注射,于注射前和注射后30,60,90,120min測定血糖,并與對照組糖尿病大鼠做統計學兩兩比較。外周血CD4+,CD4+T細胞亞群及IL-2含量試驗并進行統計學分析。 

結果:應用不同免疫抑制劑方案后,移植受體存活時間比較應用不同免疫抑制劑方案后,移植受體平均存活時間如下表,一般認為移植物存活時間超過100天即為長期存活。可以看出應用Tacrolumus+Rapamycin的組,存活時間約為140天左右,85.7%的大鼠存活時間超過100天,明顯高于對照組(P=0.000),具有顯著性差異(表6-1);應用Tacrolumus+Rapamycin+AntiIL-2antibody的組(n=7),移植受體存活時間平均約為161天左右,其中28.5%的大鼠存活時間超過200天,一只為109天,五只大鼠存活時間超過150天,兩只超過200天,與對照組相比,(P<0.001),具有顯著性差異。各組腹腔內注射葡萄糖后,對照組血糖濃度明顯高于其他四組,60分鐘以后,對照組血糖水平下降緩慢,直到120分鐘仍然維持高血糖狀態,恢復緩慢,另外四組中T+A+R聯合用藥組血糖zui終恢復到糖耐量試驗前的水平,與對照組相比,有顯著性差異,(P<0.001)。 

結論:根據Edmontonprotocol,選擇性的應用Tacrolimus,Rapamycin,Anti-interleukin-2antibody三種藥物,防治移植術后機體免疫系統的排斥反應,均不同程度的延長了移植物的存活時間,其中以三種藥物聯合應用,移植物存活時間zui長。免疫抑制劑能夠明顯提高大鼠胰島細胞移植的長期存活率,延長移植物存活時間,與對移植免疫排斥反應的抑制作用,并用各種相關指標顯示出來。


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