用稀釋液代替檢測樣本、用以觀測zui終反應的顯色“本底”、并用于酶標儀消除、扣除“本底”，即：以本底為“零”讀取陽性、陰性對照孔和樣本檢測孔的吸光值（A）；或者，在計算陰性對照均值（NCx）、陽性對照均值（PCx）、樣本讀數的S/C.O.值時減去空白對照的本底吸光值。

陰性對照，應當是本項檢測試驗中采用與待撿物具有同源性和同質性，又不含有待檢物質，并能客觀比較和鑒別處理因素（血清免疫學試驗中有特異性抗原與抗體反應）之間的差異。　陰性對照的基本組成也應該盡量與檢測樣本的組成一致，先行檢測確定其中不含待檢物質。比如，檢測人血清標本時，陰性陽性對照同陰性對照，只是采用“精選”的含有待檢物質的人血清制備而成。所謂“精選”，就是把收集的陽性人血清經過數種試驗進行“篩試”、把含有“干擾性物質”的血清剔除、不用，以避免出現“假陽性”干擾試驗結果。   

陽性對照的基本組成應該盡量與檢測樣本的組成一致，一般陽性對照多以含蛋白保護劑的緩沖液為基質，加入一定量的待檢物質。比如，以人血清為標本的測定，陽性對照多用確定的病人血清或者以復鈣人血漿為原料加入一定量標準品。