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蘇州阿爾法生物實驗器材有限公司


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Mouse ACE ELISA 試劑盒 EK05582

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產(chǎn)品型號

品       牌

廠商性質(zhì)經(jīng)銷商

所  在  地蘇州市

聯(lián)系方式:耿少華查看聯(lián)系方式

更新時間:2023-06-28 07:20:33瀏覽次數(shù):91次

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經(jīng)營模式:經(jīng)銷商

商鋪產(chǎn)品:842條

所在地區(qū):江蘇蘇州市

聯(lián)系人:耿少華 (經(jīng)理)

產(chǎn)品簡介

Mouse ACE ELISA 試劑盒EK0558 血管緊張素I轉(zhuǎn)化酶ELISA試劑盒 主要用于體外定量分析鼠血清、血漿、細胞裂解液、細胞培養(yǎng)上清。

詳細介紹

● 產(chǎn)品介紹/ product introduction
Mouse ACE ELISA Kit 


ELISA 試劑盒

 Mouse ACE ELISA 試劑盒  EK0558

            產(chǎn)品信息 


血管緊張素I 轉(zhuǎn)化酶ELISA 試劑盒

產(chǎn)品編號:EK0558

規(guī)格: 96T

檢測范圍:93.8pg/mlf 6ng/ml。

敏感性: <10pg/ml

特異性: 系統(tǒng)和其它細胞因子無交叉反應。

保存: 2-8℃ (頻繁使用時) ;-20℃ (長時間不用時 ) 。

有效期:6個月(4℃) ; 12個月  (-20℃) 。

用途: 用于體外定量分析鼠血清、血漿、細胞裂解液、細胞培養(yǎng)上清。

● 工作原理/ Principle

Angiotensin I Converting Enzyme, ACE。血管緊張素 I轉(zhuǎn)化酶,是一種鋅金屬肽酶,對水和 鹽的代謝及維持血壓起重要作用。它切除血管緊張素I的C端二肽,產(chǎn)生具有升壓活性的 血管緊張素II。同樣的機制滅活緩激肽(brandykinin),此外還通過類似的機制在免疫、生 育、神經(jīng)調(diào)節(jié)方面發(fā)揮作用。可溶性 ACE來源于膜型ACE存在于血、羊水、腦脊液等多 種體液。

博士德所提供的小鼠ACE ELISA Kit是典型的夾心法酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒(Enzyme Linked-Immuno-Sorbent Assay, ELISA)。預先包被的抗體和檢測相抗體都是近99%純度的 親和純化多克隆抗體。檢測相抗體經(jīng) (biotin)標記。樣品和標記抗體先后加 入酶標板孔反應后,PBS或TBS洗滌。隨后加入過氧化物酶標記的親和素反應;經(jīng)過PBS 或TBS的洗滌后用底物TMB顯色。TMB 在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸 的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的ACE呈正相關。

● 試劑盒內(nèi)容參數(shù)  / SPECIFICATION

內(nèi)容

規(guī)格

數(shù)量

預包被抗小鼠ACE抗體的96孔板

96T

1

重組小鼠ACE凍干標準品

10ng/

2

標記抗小鼠ACE(100X)

100ul

1

親和素-過氧化物酶復合物(ABC ) (100X)

100ul

1

樣品稀釋液

30ml

1

抗體稀釋液

12ml

1

ABC稀釋液

12ml

1

TMB顯色液

10ml

1

終止液

10ml

1

洗滌緩沖液(25X)

20ml

1


● 操作及儲存/ Content and storage

    需要而未提供的試劑和器材

    .標準規(guī)格酶標儀。

    .自動洗板機。

    3,恒溫箱

    .系列可調(diào)節(jié)移液器及吸頭,一次檢測樣品較多時,用多通道移液器。

    .干凈的試管和Eppendof管。

    .用去離子水將25X洗滌緩沖液稀釋25倍,成1X洗滌緩沖液。

    注意事項

    .使用前TMB顯色液應為無色透明溶液,若發(fā)現(xiàn)顏色異常,請及時與廠家聯(lián)系。

    .用戶在初次使用試劑盒時,應將各種試劑管離心數(shù)分鐘,以便試劑集中到管底。

    要嚴格避免操作過程中酶標板干燥。干燥會使酶標板上生物成份迅速失活。

    .為免交叉污染,要避免重復使用手中的吸頭和試管。

    .禁止混用不同批次試劑盒內(nèi)的試劑。

    .本公司提供的96孔酶標板是單條可拆型酶標板,用戶可按需求使用;剩余的酶標板請 按保存條件貯存。

    .揭封板膜和覆蓋封板膜時應避免用力過大導致液體濺出。

    洗板方法

    手工洗板方法:吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標板內(nèi)的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水 紙,酶標板朝下用力拍幾次;將1X洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔內(nèi),浸泡1-2分鐘。根據(jù) 需要,重復此過程數(shù)次。

    自動洗板:如果有自動洗板機,應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。

    樣品的準備和保存

    樣品如果不立即分析,應分裝后冷凍保存,且避免反復凍融。

    細胞培養(yǎng)上清一一離心去除沉淀,立即分析或分裝后-20℃冷凍保存。

    血清一一用干凈試管收集血液,室溫凝固2小時,離心1000Xg 15分鐘,收集血清。立即 分析或分裝后-20℃冷凍保存。

    血漿一一用干凈試管收集肝素抗凝血液,30分鐘內(nèi)離心,1000Xg 15分鐘,收集血漿。立 即分析或分裝后-20℃冷凍保存。EDTA或檸檬酸鹽抗凝血不適合。

    細胞裂解液一一對于貼壁細胞,去除培養(yǎng)液,用PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍。 加入適量裂解液,用槍吹打數(shù)下,使裂解液和細胞充分接觸。通常10 秒后,細胞就會被裂 解。對于懸浮細胞,離心收集細胞,用PBS、 生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍。加入適量 裂解液,用槍吹打把細胞吹散,用手指輕彈以充分裂解細胞。充分裂解后, 10000—14000g 離心3-5分鐘,取上清。立即分析或分裝后-20℃冷凍保存。

    試劑的準備和保存

    A. ACE標準品的稀釋和使用:在使用前2小時內(nèi)準備。

    試劑盒提供2管標準品,每管10ng,每次使用1管。

    1,  配制10,000pg/ml標準品:取1ml樣品稀釋液加入標準品管內(nèi),蓋好后靜置10分鐘以 上,然后反復顛倒/搓動以助溶解。

    2,  配制6000pg/ml標準品:取0.6ml 10,000pg/ml的標準品加入有0.4ml樣品稀釋液的

    Eppendorf管中,混勻,做上標記。

    3,配制3000pg/mlf 93.8pg/ml標準品:準備6只Eppendorf管,每管加0.3ml樣品稀釋 液,分別標記上 3000pg/ml, 1500pg/ml, 750pg/ml, 375pg/ml, 187.5pg/ml, 93.8pg/ml 。 取0.3ml 6000pg/ml的標準品加入標記3000pg/ml的管中,混勻后同樣取出0.3ml ,加入 下一只管中。余同此類推,直到只樣品管。

    注意:已經(jīng)稀釋的標準品(10,000pg/ml),應在12小時內(nèi)使用。-20℃冷凍保存條件 下,2天內(nèi)可以使用,但不得反復凍融。

    .標記抗小鼠ACE抗體工作液的準備:在使用前2小時內(nèi)準備。

    .根據(jù)每孔需要100ul計算總的用量(實際配制時應多配制100ul-200ul)。

    .按1ul標記抗小鼠ACE加抗體稀釋液99ul的比例配制工作液。輕輕混勻。

    C.親和素-過氧化物酶復合物(ABC)工作液的準備:在使用前1小時內(nèi)準備。

    .根據(jù)每孔需要100ul計算總的用量(實配時應多配制100ul-200ul)。

    .按1ul親和素-過氧化物酶復合物(ABC)加ABC稀釋液99ul的比例配制工作液。輕 輕混勻。

    操作程序

    己稀釋好的ABC和TMB顯色液在加入酶標板孔前都應預先在37℃中平衡至少30分鐘。 試劑或樣品稀釋時,切不可忘記混勻 。每次檢測都應該做標準曲線。用戶須估計樣品待測 因子的含量,決定適當?shù)南♂尡稊?shù)。

    .確定本次檢測所需的已包被抗體的酶標板孔數(shù)目,并增加1孔作為TMB空白顯色 孔。總數(shù)=樣品數(shù)+9;做雙份檢測時又2。其余重包裝好放入冰箱中。

    . 將 6000pg/ml , 3000pg/ml, 1500pg/ml, 750pg/ml, 375pg/ml, 187.5pg/ml, 93.8pg/ml 的

    標準品各100ul依次加入一排7孔中,1孔只加樣品稀釋液的作為零孔。對于血清、 血漿、細胞裂解液或細胞培養(yǎng)上清,每孔加100ul已用樣品稀釋液稀釋的樣品。

    1 .酶標板加上封板膜,37。。反應90分鐘。

    2 .反應后用自動洗板機吸去酶標板內(nèi)的液體;或甩去酶標板內(nèi)液體,再對著吸水紙拍幾 下。不洗。

    3 .將準備好的抗小鼠ACE抗體工作液按每孔100ul依次加入。(TMB空白顯色孔 除外)。酶標板加上封板膜,37℃反應60分鐘。

    4 . 1X洗滌緩沖液洗滌3次,每次浸泡1分鐘左右(每孔洗液至少300ul)。

    5 .將準備好的ABC工作液按每孔100ul依次加入(TMB空白顯色孔除外)。酶標板加封 板膜,37℃反應30分鐘。

    6 . 1X洗滌緩沖液洗滌5次,每次浸泡1-2分鐘左右(每孔洗液至少300ul)。

    7 .按每孔90ul依次加入已在37℃平衡30分鐘的TMB顯色液,37℃避光反應15-20分 鐘(注意:顯色時間供參考,因用戶實驗室條件差異,顯色時間會有所不同。此 時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度藍色,后3-4孔差別不明顯)。

    8 .按每孔100ul依次加入終止液,此時藍色立轉(zhuǎn)黃色。

    9 .用酶標儀在450nm測定O.D.值。

    有兩種設定空白對照的方案:

    (1)將TMB空白顯色孔(只加TMB顯色液和終止液)設為對照。所有的標準品和樣 品的吸光值減去TMB空白顯色孔的吸光值后,在坐標紙上畫出曲線,以吸光值作為 縱坐標,以濃度作為橫坐標。

    (2)將零孔設為對照。所有的標準品和樣品的吸光值減去零孔的吸光值后,得到的數(shù) 據(jù)可以直接在坐標紙上畫出曲線。

    12.根據(jù)樣品的吸光值在坐標上找出對應的濃度。用戶也可以使用各種應用軟件來計算。

    應記住由于樣品稀釋了 N倍,其實際濃度應該XN。



    操作程序總結(jié):

    1 .加樣品和標準品,37℃反應90分鐘。不洗。

    2 .加標記抗體,37℃反應60分鐘。1X洗滌緩沖液洗滌3次。

    3 .加ABC, 37℃反應30分鐘。1X洗滌緩沖液洗滌5次。

    4 . TMB37℃反應 15-20 分鐘。

    5 .加入終止液,讀數(shù)。

    典型數(shù)據(jù)

    TMB37℃反應15分鐘。

    (數(shù)據(jù)供參考,不同用戶顯色時間會有所不同)

    濃度

    0.0pg/ml

    93.8pg/ml

    187.5pg/ml

    375pg/ml

    750pg/ml

    1500pg/ml

    3000pg/ml

    6000pg/ml

    O.D.

    0.088

    0.169

    0.230

    0.315

    0.498

    0.942

    1.447

    2.178


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