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CCK8細胞增殖和活性檢測試劑盒-cck8法檢測細胞活力- cck8試劑-碧云天生物2

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更新時間:2023-06-25 08:34:17瀏覽次數:143次

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產品簡介

用于生物活性因子的活性檢測、抗腫瘤藥物的篩選、細胞增值的測定、細胞毒性檢測以及藥敏等與細胞活性和增殖相關的實驗。本試劑盒使用方便,試劑盒包含一管已經配制好的含有水溶性四唑的CCK-8溶液,即開即用,無需其他準備步驟。

詳細介紹

    CCK-8 細胞增殖與活性檢測試劑盒- cck8法檢測細胞活力

CCK-8細胞毒性檢測試劑盒

    貨號 規格
     BDXB0002-5  5ml
     BDXB0002-10  10ml
     BDXB0002-30  30ml

    產品概述

           CCK-8(Cell Counting Kit-8)是一種基于WST(水溶性四唑鹽,一種類似于MTT的化合物)的細胞增殖與活性檢測試劑盒,用于細胞增殖和細胞毒性的快速高靈敏度檢測。在電子耦合試劑存在的情況下,WST被線粒體內的脫氫酶還原成橙黃色的水溶性的甲臜染料(formazan),甲臜染料直接溶解在培養基中。細胞增殖越多越快,則培養基的顏色越深;細胞毒性越大,則顏色越淺。對于同樣的細胞,生成甲臜物的數量與活細胞的數量成正比,顏色的深淺和細胞數目呈線性關系。
     
    用途
           用于生物活性因子的活性檢測、抗腫瘤藥物的篩選、細胞增值的測定、細胞毒性檢測以及藥敏等與細胞活性和增殖相關的實驗。本試劑盒使用方便,試劑盒包含一管已經配制好的含有水溶性四唑的CCK-8溶液,即開即用,無需其他準備步驟。檢測過程也無需采用額外的步驟去溶解甲臜,可直接使用96孔板或者384孔板在酶標儀上檢測,適合大規模,高通量的樣品檢測。

    CCK-8與MTT法的比較
    CCK-8 MTT
     還原后的甲臜是水溶性的(不需要溶解)  還原后的甲臜是非水溶性的(需要加有機溶劑溶解)
     重現性好  重現性差
     操作簡單  操作繁瑣
     測定波長:450-490nm  測定波長:550-600nm
     單一溶液,即開即用  需要加有機溶劑,有毒性


    參考數據

    (1)CCK-8與MTT、XTT、MTS試劑盒比較圖
    CCK-8和MTT比較
    (2)博奧龍CCK-8與其它公司產品比較圖
    CCK-8細胞活性檢測

    使用方法

     一、制作標準曲線(測定細胞具體數量時)

     1. 先用細胞計數板計數所制備的細胞懸液中的細胞數量,然后接種細胞。

    2. 按比例(例如:1/2比例)依次用培養基等比稀釋成一個細胞濃度梯度,一般要做3-5個 細胞濃度梯度,每組3-6個復孔。 

    3. 接種后培養2-4小時使細胞貼壁,然后加CCK-8試劑培養一定時間后測定OD值,制作出 一條以細胞數量為橫坐標,OD值為縱坐標的標準曲線。根據此標準曲線可以測定出未 知樣品的細胞數量(適用此標準曲線的前提是實驗的條件要一致,尤其加入CCK-8后的 培養時間要一致)。

    二、細胞活性檢測 1. 在96孔板中接種細胞懸液(100μl/孔)。

    1.將培養板放在培養箱中預培養(37℃,5% CO2)。

    2. 向每孔加入10μl的CCK-8溶液(注意不要在孔中生成氣泡,以免影響OD的讀數)。 

    3. 將培養板在培養箱內孵育1-4小時。 

    4. 用酶標儀測定450nm處的吸光度。 

    5. 如果暫時不測定OD值,可以向每孔中加入10μl的0.1M的HCl溶液或1% w/v SDS溶液, 并遮蓋培養板避光室溫保存,24小時內吸光度不會發生變化。 

    三、細胞增殖-毒性檢測(以96孔板為例) 

    1. 在96孔板中配置100μl的細胞懸液(通常細胞增殖實驗每孔加入100μl約2000個細胞,細 胞毒性實驗每孔加入100μl約5000個細胞。具體每孔所用的細胞的數目,需根據細胞的 大小、細胞增殖速度的快慢等因素決定)。按照實驗需要,進行預培養。 

    2. 向培養板加入1-10μl不同濃度的待測藥物刺激。

    3. 將培養板在培養箱孵育一段適當的時間(后面有具體細胞的建議時間,例如:6、12、 24或48小時)。

    4. 每孔加入10μl的CCK-8溶液(注意不要在孔中生成氣泡,以免影響OD讀數)。如果起 始的培養體積為200μl,則需加入20μl CCK-8溶液,其他情況以此類推。可以用加了相 應量細胞培養液和CCK-8溶液但沒有加入細胞的孔作空白對照。如果擔心所使用的藥物 會干擾檢測,需設置加了相應量細胞培養液、藥物和CCK-8溶液但沒有加入細胞的孔作 為空白對照。 

    5. 在細胞培養箱內繼續孵育1-4小時(對于大多數情況孵育1小時就可以)。時間的長短根 據細胞的類型和細胞的密度等情況而定,初次實驗時可以在0.5、1、2 和4小時候分別 用酶標儀檢測,然后選取吸光度范圍比較適宜的一個時間點用于后續實驗。 

    6. 用酶標儀測定在450nm處的吸光度。可以使用大于600nm的波長,例如650nm,作為參 考波長進行雙波長測定。 

    7. 如果暫時不測定OD值,可以向每孔中加入10μl 0.1M的HCl溶液或者1% w/v SDS溶液, 并遮蓋培養板避光室溫保存,24小時內吸光度不會發生變化。 

    注意:如果待測物質有氧化或還原特性,可在加CCK-8之前更換新鮮培養基(先用培養 基洗滌細胞兩次),去掉藥物影響。如果藥物影響比較小,可以不更換培養基,直接扣 除培養基中加入藥物后的空白吸收即可。 

    活力計算

     細胞活力*(%)=[A(加藥)-A(空白)]/[A(0 加藥)-A(空白)] ×100 A

    (加藥):具有細胞、CCK-8溶液和藥物溶液的孔的吸光度 A

    (空白):具有培養基和CCK-8溶液而沒有細胞的孔的吸光度 A

    (0 加藥):具有細胞、CCK-8溶液而沒有藥物溶液的孔的吸光度 *細胞活力:細胞增殖活力或細胞毒性活力 

    注意事項

    1. 由于使用96孔板進行檢測,如果細胞培養時間較長,一定要注意蒸發的問題。一方面, 由于96孔板周圍一圈最容易蒸發,可以采取棄用周圍一圈的辦法,改加PBS,水或培養 液;另一方面,可以把96孔板置于靠近培養箱內水源的地方,以緩解蒸發。 

    2. CCK-8檢測細胞活性原理是通過檢測活細胞脫氫酶催化的反應。任何待測體系中存在還原劑,例一些抗氧化劑會干擾檢測,需設法去除。

    3. 建議先做幾個孔摸索接種細胞的數量和加入CCK-8試劑后的培養時間。

     4. 建議采用多通道移液器,可以減少平行孔間的差異。加入CCK試劑時,建議斜貼著培 養板壁加,不要查到培養基液面下加樣,溶液產生氣泡,會干擾OD讀數。

     5. 當使用標準96孔板時,貼壁細胞的最小接種量至少為1000個/孔(100μl培養基)。檢測 白細胞時的靈敏度相對較低,因此推薦接種量不低于2500個/孔(100μl培養基),且培 養時間長一些。如果要使用24孔板或6孔板實驗,需先計算每孔相應的接種量,并按照 每孔培養基總體積的10%加入CCK-8溶液。 

    6. 加入CCK-8溶液時,如果細胞培養時間較長,培養基顏色已變化或pH值變化,建議換 用新鮮的培養基。 

    7. 如果沒有450nm的濾光片,可以使用吸光度在450-490nm之間的濾光片,但是450nm濾 光片的檢測靈敏度。

    8. 酚紅和血清對本試劑盒的測定無明顯影響。培養基中酚紅的吸光度可以在計算時,通過 扣除空白孔中本底的吸光度而消去,因此不會對檢測造成影響。

    9. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

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