PreCap Desalting 葡聚糖基質(zhì)凝膠過濾層析介質(zhì)
PreCap Desalting適用于分子量大于5000Da的蛋白或其他大分子樣品的脫鹽、緩沖液置換或小分子的去除。
PreCap Desalting 葡聚糖基質(zhì)凝膠過濾層析介質(zhì) 裝有1 ml或5 ml Smartdex G-25中。Smartdex G-25系列介質(zhì)是一類以葡聚糖為基質(zhì)的凝膠過濾層析(gel filtration chromatography)介質(zhì),其工作原理主要是利用具有網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的葡聚糖凝膠的分子篩作用,根據(jù)被分離物質(zhì)的分子大小不同來進(jìn)行分離。
表 1. PreCap Desalting 產(chǎn)品性能
2. 使用說明
2.1緩沖液的準(zhǔn)備
所用水和緩沖液在使用之前建議用0.22 pm或0.45 pm濾膜過濾。
平衡液為蛋白脫鹽后,用于保護(hù)蛋白的溶液,根據(jù)客戶需求自行選擇。
2.2樣品準(zhǔn)備
樣品在上樣前建議離心或用0.22 pm或0.45|jm濾膜過濾,減少雜質(zhì),防止堵塞柱子。
2.3樣品脫鹽
PreCap Desalting是一種脫鹽預(yù)裝柱產(chǎn)品,可以用各種常規(guī)的中低壓色譜系統(tǒng),以AKTA儀器使用為例介紹PreCap Desalting的使用方 法。
1) 將系統(tǒng)管道中注滿去離子水。去掉預(yù)裝柱上塞,連接至色譜系統(tǒng),不要旋緊。再折斷預(yù)裝柱下口,將預(yù)裝柱接到色譜系統(tǒng)中,并旋緊。 最后旋緊預(yù)裝柱上端的色譜系統(tǒng)接頭。
2) 用3-5倍柱體積的去離子水沖洗出存儲(chǔ)緩沖液。
3) 使用至少5倍柱床體積的平衡液平衡色譜柱。1 ml預(yù)裝柱推薦流速0.2 ml/min, 5 ml預(yù)裝柱推薦流速為1 ml/mino
4) 利用樣品環(huán)上樣。加入10%柱體積的樣品,不足時(shí)用平衡液將樣品稀釋至相應(yīng)體積再上樣。
5) 加入平衡液繼續(xù)沖洗,分管收集流穿液,檢測(cè)樣品回收率和脫鹽效率。
3. 清洗及保存
如果柱子的流速變慢或者脫鹽效果變差,為除去殘留的雜質(zhì),如變性蛋白或脂質(zhì)等,有時(shí)需要對(duì)脫鹽柱進(jìn)行在位清洗。常用的清洗液為
0.1-0.2 M NaOH或非離子型去垢劑。
1) 使用一倍的柱體積0.1-0.2 M NaOH沖洗介質(zhì),流速控制在0.2 ml/min左右。
2) 用足夠量的去離子水,沖洗介質(zhì),1 ml預(yù)裝柱推薦流速0.2 ml/min, 5 ml預(yù)裝柱推薦流速為1 ml/min,直至pH值至中性。
3) 用至少三倍柱體積20%乙醇溶液沖洗介質(zhì),然后分別蓋上下堵頭和上塞,將介質(zhì)保存于20%乙醇保護(hù)液,置于2-8°C保存。 注:不建議介質(zhì)多次重復(fù)再生和使用。
4. PreCap Desalting 葡聚糖基質(zhì)凝膠過濾層析介質(zhì) 訂購信息及相關(guān)產(chǎn)品