蘇州阿爾法生物實驗器材有限公司
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所 在 地蘇州市
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更新時間：2023-06-21 07:50:46瀏覽次數(shù)：68次
聯(lián)系我時，請告知來自 儀表網(wǎng)細胞名稱：基因敲除細胞株-MHCC97H KO-hKLF4細胞簡稱：MHCC97H KO-hKLF4產(chǎn)品貨號：CGKO-M2125修飾基因：hKLF4修飾類型：敲除轉(zhuǎn)導方法：質(zhì)粒電轉(zhuǎn)抗性基因：Puro克隆類型：純合子細胞鑒定：PCR，測序
基因敲除細胞株-MHCC97H KO-hKLF4
細胞名稱：基因敲除細胞株- MHCC97H KO-hKLF4
細胞簡稱：MHCC97H KO-hKLF4
產(chǎn)品貨號：CGKO-M2125
修飾基因：hKLF4
修飾類型：敲除
轉(zhuǎn)導方法：質(zhì)粒電轉(zhuǎn)
抗性基因：Puro
克隆類型：純合子
細胞鑒定：PCR，測序
種屬來源：人
組織來源：肝
疾病特征： 高轉(zhuǎn)移潛能肝癌細胞
細胞形態(tài)：上皮細胞樣
生長特性：貼壁生長
培養(yǎng)體系：DMEM-H+10%FBS+1%Glutamax+1% Sodium Pyruvate+1%P/S
傳代比例：1:3-1:6，每2-3天換液一次
傳代周期：48-72 h
培養(yǎng)條件：氣相：95%空氣+5%CO2，溫度：37℃
凍存條件：60%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+30%FBS+10%DMSO，液氮儲存
質(zhì)量檢測：細菌、真菌、支原體檢測均為陰性
參考文獻：
1. Dang H., Steinway S.N., Ding W., Rountree C.B.
Induction of tumor initiation is dependent on CD44s in c-Met(+) hepatocellular carcinoma.
BMC Cancer 15:161-161(2015)
2. Tian M.-M., Cheng H., Wang Z.-Q., Su N., Liu Z.-X., Sun C.-Q., Zhen B., Hong X.-C., Xue Y., Xu P.
Phosphoproteomic analysis of the highly-metastatic hepatocellular carcinoma cell line, MHCC97-H.
Int. J. Mol. Sci. 16:4209-4225(2015)
3. Wang K., Lim H.Y., Shi S., Lee J., Deng S., Xie T., Zhu Z., Wang Y., Pocalyko D., Yang W.J., Rejto P.A., Mao M., Park C.-K., Xu J.
Genomic landscape of copy number aberrations enables the identification of oncogenic drivers in hepatocellular carcinoma.
Hepatology 58:706-717(2013)
4. Li Y., Tian B., Yang J., Zhao L., Wu X., Ye S.-L., Liu Y.-K., Tang Z.-Y.
Stepwise metastatic human hepatocellular carcinoma cell model system with multiple metastatic potentials established through consecutive in vivo selection and studies on metastatic characteristics.
J. Cancer Res. Clin. Oncol. 130:460-468(2004)
5. Ding S.-J., Li Y., Shao X.-X., Zhou H., Zeng R., Tang Z.-Y., Xia Q.-C.
Proteome analysis of hepatocellular carcinoma cell strains, MHCC97-H and MHCC97-L, with different metastasis potentials.
Proteomics 4:982-994(2004)
| 細胞接收后處理方法
1.運輸方式：凍存管（默認發(fā)送方式）
① 請在收到細胞后，先檢查包裝是否完整，干冰是否充足，凍存管有無破損等情況，并核對細胞管上的標簽信息，細胞管數(shù)是否與發(fā)貨清單一致。如有異常情況，請及時與我們聯(lián)系。
② 收到細胞后如不立即進行實驗，則請將細胞放至-80℃或液氮中保存。
③ 實驗前開啟水浴鍋并預熱培養(yǎng)基，并備好15mL離心管加入5mL預熱后的培養(yǎng)基。
④ 將凍存管置于37℃水浴鍋內(nèi)，快速搖動解凍直到內(nèi)容物融化，同時需注意避免水面沒過管口。
⑤ 將凍存管外壁進行常規(guī)消毒后，在超凈臺內(nèi)小心開蓋，盡量避免氣泡溢出，輕柔吹打數(shù)次，轉(zhuǎn)移至15mL離心管內(nèi)。使用1 mL培養(yǎng)基清洗凍存管內(nèi)壁，一并收集至15mL離心管內(nèi)。
⑥ 250g離心5min，收集細胞沉淀，棄掉上清并加入2mL培養(yǎng)基重懸。
⑦ 取20μL細胞懸液至EP管，臺盼藍染色并計數(shù)，記錄細胞數(shù)量和存活率。如有異常請及時與我們聯(lián)系，如無臺盼藍，可略過該步驟。
⑧ 將重懸后的細胞接種至合適大小的培養(yǎng)器皿中，放置于培養(yǎng)箱內(nèi)進行培養(yǎng)。
⑨ 24h后鏡下拍照并反饋我們，換液后繼續(xù)培養(yǎng)。
2.運輸方式：培養(yǎng)瓶（貼壁細胞）
① 請在收到細胞后，先檢查包裝是否完整，有無破損漏液的情況，并核對細胞瓶上的標簽信息，細胞瓶數(shù)是否與發(fā)貨清單一致。如有異常情況，請及時與我們聯(lián)系。
② 觀察瓶內(nèi)的培養(yǎng)基是否澄清，鏡下觀察細胞是否狀態(tài)良好，并將細胞容器外壁進行常規(guī)消毒后，置于培養(yǎng)箱內(nèi)放置2-3h，讓脫壁的細胞可以重新貼附。
③ 小心開蓋移去瓶內(nèi)的培養(yǎng)基，更換為細胞專用的培養(yǎng)基，按照培養(yǎng)器皿決定用量。若細胞脫壁過多，可將原培養(yǎng)基離心獲得細胞沉淀，再接種回原瓶內(nèi)。
④ 鏡下拍照并反饋我們，如細胞匯合度較低，則放置于培養(yǎng)箱內(nèi)進行培養(yǎng)。如細胞匯合度達到80%以上，則可按照常規(guī)方法進行消化傳代。
3.運輸方式：培養(yǎng)瓶（懸浮細胞）
① 請在收到細胞后，先檢查包裝是否完整，有無破損漏液的情況，并核對細胞瓶上的標簽信息，細胞瓶數(shù)是否與發(fā)貨清單一致。如有異常情況，請及時與我們聯(lián)系。
② 觀察瓶內(nèi)的培養(yǎng)基是否澄清，鏡下觀察細胞是否狀態(tài)良好，拍照并反饋我們。
③ 將細胞容器外壁進行常規(guī)消毒后，置于超凈工作臺內(nèi)小心開蓋。將瓶內(nèi)的培養(yǎng)基全部轉(zhuǎn)移至若干50 mL離心管內(nèi)，并清洗培養(yǎng)瓶內(nèi)壁一并收集。
④ 250g離心5min收集細胞沉淀，棄掉上清，使用新鮮的培養(yǎng)基重懸至合適密度。接種至合適的培養(yǎng)器皿中，置于培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。
⑤ 培養(yǎng)24h后觀察細胞狀態(tài)和密度，按照常規(guī)方法進行傳代。
4.運輸方式：血清管
① 請在收到細胞后，先檢查包裝是否完整，有無破損漏液的情況，并核對細胞管上的標簽信息，細胞管數(shù)是否與發(fā)貨清單一致。如有異常情況，請及時與我們聯(lián)系。
② 收到細胞后請盡快進行實驗，如不能及時處理，請將細胞放至常溫環(huán)境，通常15-25℃為佳，并盡量在24h內(nèi)完成實驗。否則細胞狀態(tài)和存活率將會受到一定的影響。
③ 血清管懸液可能會呈現(xiàn)一定程度的渾濁狀態(tài)，這屬于正常現(xiàn)象，請放心操作。
④ 將血清管外壁進行常規(guī)消毒后，在超凈臺內(nèi)小心開蓋，盡量避免氣泡溢出，輕柔吹打數(shù)次，轉(zhuǎn)移至15mL離心管內(nèi)。
⑤ 吸取1mL 培養(yǎng)基清洗血清管內(nèi)壁，同樣轉(zhuǎn)移至15mL管，并吹打均勻。
⑥ 取20μL細胞懸液至EP管，臺盼藍染色并計數(shù)，記錄細胞數(shù)量和存活率。如有異常請及時與我們聯(lián)系，如無臺盼藍，可略過該步驟。
⑦ 250g離心5min，收集細胞沉淀，并接種至合適大小的培養(yǎng)器皿中，放置于培養(yǎng)箱內(nèi)進行培養(yǎng)。
⑧ 24h后鏡下拍照并反饋我們，并根據(jù)匯合度繼續(xù)培養(yǎng)或消化傳代。
5.運輸方式：“細胞膠囊"技術(shù)
① “細胞膠囊"包括細胞管和Buffer共2個試劑管。請在收到細胞后，先檢查真空包裝袋內(nèi)的“細胞膠囊"管身是否完好，培養(yǎng)液是否外滲，并核對管身上的標簽信息，細胞管數(shù)是否與發(fā)貨清單一致。如有異常情況，請及時與我們聯(lián)系。
② 收到“細胞膠囊"后請盡快進行實驗，如不能及時處理，請將細胞放至常溫環(huán)境，通常15-25℃為佳，并盡量在24 h內(nèi)完成實驗，否則細胞狀態(tài)和存活率將會受到一定的影響。“細胞膠囊"管內(nèi)的培養(yǎng)液可能會呈現(xiàn)一定程度的渾濁狀態(tài)，這屬于正常現(xiàn)象，請放心操作。
③ 用75%酒精裝袋表面，在超凈臺內(nèi)取出細胞膠囊管和Buffer管，小心的打開細胞膠囊管蓋，盡量避免氣泡溢出。
④ 使用移液槍將細胞膠囊管中的培養(yǎng)液全部棄去。
⑤ 將Buffer全部加入到細胞膠囊管中，擰緊管蓋，上下顛倒3-5 min。
⑥ 觀察到細胞膠囊溶解后，小心開蓋，使用移液槍輕柔吹打數(shù)次，轉(zhuǎn)移到15 mL離心管內(nèi)。
⑦ 取20μL細胞懸液至EP管，臺盼藍染色并計數(shù)，記錄細胞數(shù)量和存活率。如有異常請及時與我們聯(lián)系。
⑧ 250 g離心4 min，收集細胞沉淀，并接種到合適大小的培養(yǎng)器皿中，放置于培養(yǎng)箱內(nèi)進行培養(yǎng)。
⑨ 24 h 后顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)，觀察細胞時請拍100×、200×各2-3張照片進行留存，所拍照片應(yīng)盡量清晰，并根據(jù)匯合度繼續(xù)培養(yǎng)或消化傳代。
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