蘇州阿爾法生物實驗器材有限公司
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CRISPR基因敲除試劑盒(Cas9x3.0)是海星生物在多年基因編輯服務的基礎上研發的高效快捷的基因敲除試劑盒。包括了人(Human) 和小鼠(Mouse)的所有基因的敲除。
| 產品名稱：CRISPR基因敲除試劑盒
| 產品貨號：Cas9x3.0
| 產品介紹
CRISPR基因敲除試劑盒(Cas9x3.0)是海星生物在多年基因編輯服務的基礎上研發的高效快捷的基因敲除試劑盒。包括了人(Human) 和小鼠(Mouse)的所有基因的敲除。
Cas9x3.0試劑盒包含2個Cas9X™算法優化的 gRNA序列載體和特異的同源DNA片段，DNA片段含有抗性和GFP 熒光，并攜帶有一段特殊同源序列，不僅可為后續基因敲除細胞的篩選提供藥物抗性，也可以通過流式篩選獲得敲除細胞。
Cas9x3.0試劑盒對分裂細胞和非分裂細胞都有非常高的敲除效率。
| 產品特點
敲除高效率——比病毒敲除方式更實惠、更穩定、更安全
實驗超簡單——操作流程簡單，能養好細胞就能做基因敲除
| 產品構成
| 產品原理
CRISPR基因敲除試劑盒 (Cas9x3.0)依據HDR和 NHEJ修復原理進行產品開發。
優化的gRNA引導Cas9蛋白對特定位點進行切割，產生DNA 雙鏈斷裂（Double-Strａnd Break, DSB），并誘導同源線性化DNA片段（攜帶抗性基因和熒光基因）整合到該位點，再通過抗性藥物（puroR ）或熒光（GFP）進行篩選，從而獲得基因敲除的細胞和單克隆。
CRISPR基因敲除試劑盒 (Cas9x3.0) 的敲除效率是傳統基因敲除策略的2~5倍。因為其的敲除策略是通過在基因位導入 Donor DNA（ puroR & GFP ）從而達到敲除目的蛋白效果，同時也可以在DSB位點導入序列移碼，導致蛋白翻譯提前終止。這兩個原理的疊加，可以輕松獲得“等位基因"純合敲除細胞株。
| 應用流程
CRISPR基因敲除試劑盒 (Cas9x3.0)操作步驟(脂質體轉染法)：
本試劑盒建議采用轉染試劑是Lipofectamine® 2000 Reagent (cat#11668-030)，具體參照轉染試劑說明材料。不同類型的轉染試劑，請按照制造商的操作說明進行轉染。
注意：懸浮細胞不推薦使用脂質體轉染法。
CRISPR基因敲除試劑盒 (Cas9x3.0)操作步驟(電轉化法)：
本試劑盒推薦Neon轉染系統，具體參照設備對每種細胞參數。不同類型的電轉設備，請按照制造商的操作說明進行優化。
注意：懸浮細胞推薦使用電轉化法。
CRISPR基因敲除試劑盒 (Cas9x3.0)配有eGFP對照DNA，可以按照實際使用的方法和細胞情況，進行實驗摸索，建議48小時后的目的細胞的eGFP的陽性率不低于50%， Cas9x3.0試劑盒才能獲得良好的敲除效果。
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