WB, Western blot; IF, Immunofluorescence; IHC, Immunohistochemistry.
Mam, mammalian, including human, mouse, rat, pig, rabbit, dog, cat; C, chicken; Fi,fish; Fr, frog. 不能用于檢測(cè)bovine和yeast樣品。
本GAPDH抗體(GAPDH antibody,也稱為G3PDH antibody)為進(jìn)口分裝,用從兔肌肉純化獲得的GAPDH作為抗原制備而成的抗GAPDH小鼠單克隆抗體。克隆號(hào)為6C5。
GAPDH(Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase)是糖酵解(glycolysis)過程中的關(guān)鍵酶之一。GAPDH由4個(gè)分子量約為36kD的亞基組成,總的分子量為146kD。在SDS-PAGE凝膠電泳時(shí)解聚為單體,顯示的分子量約為36kD。哺乳動(dòng)物的GAPDH除了在糖酵解過程中起作用外,還和membrane fusioin,microtubule bundling,RNA出核運(yùn)輸,DNA復(fù)制和DNA修復(fù)等有關(guān),并和前列腺癌、神經(jīng)細(xì)胞凋亡、神經(jīng)退行性疾病等相關(guān)。
GAPDH幾乎在所有組織和細(xì)胞中組成性高表達(dá)。只有缺氧和糖尿病等情況可以在某些細(xì)胞中上調(diào)GAPDH的蛋白水平。
GAPDH在各種組織和細(xì)胞中都組成性高表達(dá),因此被廣泛用于Western時(shí)上樣量是否一致的參照(loading control)。
配套提供了Western一抗稀釋液,可以用于Western檢測(cè)時(shí)的一抗稀釋。
建議抗體使用時(shí)的稀釋比例如下(實(shí)際使用時(shí)需根據(jù)抗原水平的高低作適當(dāng)調(diào)整):
本抗體如果用于常規(guī)的Western檢測(cè),至少可以檢測(cè)40次。
包裝清單:
保存條件:
GAPDH抗體-20℃保存,Western一抗稀釋液-20℃或4℃保存,一年有效。Western一抗稀釋液優(yōu)先推薦4℃保存,長期不使用可以考慮-20℃保存,但凍融可能會(huì)導(dǎo)致出現(xiàn)輕微的渾濁和少量不溶物。
注意事項(xiàng):
在Western實(shí)驗(yàn)后,請(qǐng)注意回收稀釋的抗體。回收的抗體在進(jìn)行Western實(shí)驗(yàn)時(shí)至少可以重復(fù)使用10次。稀釋后的抗體,包括已經(jīng)使用過的稀釋抗體,4℃保存。
回收后重復(fù)使用的抗體,使用方法同新鮮稀釋的抗體。如果在重復(fù)使用過程中發(fā)現(xiàn)抗體出現(xiàn)輕微混濁現(xiàn)象,可以10000g離心1-3分鐘,取上清用于后續(xù)檢測(cè)。如果回收的抗體出現(xiàn)明顯的絮狀物或長霉長菌等情況,則可以考慮廢棄該抗體。
碧云天抗體小鼠單抗 GAPDH 使用說明 : 1. Western檢測(cè): A. 按照1:500-1000用碧云天提供的Western一抗稀釋液稀釋抗體。 B. 把經(jīng)過封閉的蛋白膜與稀釋好的一抗4℃緩慢搖動(dòng)過夜或室溫緩慢搖動(dòng)1-2小時(shí),確保稀釋的抗體至少能在搖動(dòng)的瞬間覆蓋蛋白膜。通常與一抗4℃緩慢搖動(dòng)過夜效果更好一些。 C. 回收稀釋的一抗,4℃保存以備下次繼續(xù)使用。 D. 按照Western的實(shí)驗(yàn)步驟進(jìn)行后續(xù)的洗滌、二抗孵育、洗滌和檢測(cè)等操作。 2. 免疫染色: 可以使用碧云天生產(chǎn)的 免疫染色一抗稀釋液(P0103) 稀釋抗體,使用后注意回收稀釋好的一抗。 3. 其它實(shí)驗(yàn)操作請(qǐng)自行參考適當(dāng)?shù)膒rotocol進(jìn)行。
碧云天試劑> 抗體> 常用一抗>
內(nèi)參抗體