蘇州阿爾法生物實驗器材有限公司
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Smartdex G-10過濾介質是以葡聚糖凝膠為過濾層析（gel filtration chromatography）介質，其工作原理類似親和層析主要是利用具有網狀結構的葡聚糖凝膠的分子篩作用，進行蛋白純化和蛋白分離。
Smartdex G-10系列介質是一類以葡聚糖為基質的凝膠過濾層析（gel filtration chromatography）介質，其工作原理主要是利用具有網狀結構的葡聚糖凝膠的分子篩作用，根據被分離物質的分子大小不同來進行分離。
葡聚糖凝膠是一種具有三維網狀結構的高分子化合物，它是由葡聚糖加入交聯劑通過醚鍵互相交聯聚合而成的，交聯度越大,網孔結構就越緊密，吸水后的體積膨脹就越小，能允許進入凝膠內部的分子的分子量也就越小，反之亦然。層析時，大于凝膠孔徑的大分子，被阻于凝膠相外，沿著凝膠顆粒之間的間隙走，下移速度,故洗脫下來，中分子物質部份進入凝膠內部，洗脫速度為其次，而小分子物質因全部進入凝膠，受到阻力大，故最后被洗脫下來，如此物質得到分離。
型號G表明每克于凝膠吸水量的多少，例如G-10表明每克干凝膠吸水1.0克。這表征了凝膠所能膨脹的倍數，亦間接表征了凝膠孔徑的大小。
表1.Smartdex G-10產品性能
| 項目 | 性能 |
| 顆粒大小 （干） | 100-200目 |
| 分離范圍 （球蛋白） | <7×102 Da |
| 溶脹體積（ml濕膠/g干粉） | 2.0-3.0 |
| pH穩定性 | pH 2-13 |
2.裝柱說明
Smartdex G-10 為于粉，初次使用前必須進行預處理。溶脹過程中嚴禁使用磁力攪拌，以免使微球破碎。
加入足夠的水或緩沖液進行溶脹，室溫3h 以上或水浴 90℃、1h。如果室溫溶脹則需要進行真空脫氣，然后將溶脹好的微球按照3∶1（v/v）加入水或緩沖液攪拌使其形成均勻的75%膠懸液。如果是重復使用的可以將 20%乙醇傾去，加水或緩沖液攪拌均勻成75%的膠懸液。
2.2 Smartdex G-10 的裝填
2.2.1重力柱的裝填
1）取合適規格的重力層析柱，裝入下墊片，加入適量純水潤洗柱管和墊片，關閉下出口。
2）將溶脹好的介質混合均勻，用槍頭吸取適量漿液加入至重力柱中（介質實際體積占懸液的75%），打開下出口流干保護液。3）加入適量純水沖洗介質，待柱管中液體重力流干后，關閉下出口。4）裝入潤洗后的上墊片，確保墊片與填料之前沒有空隙，且保持水平。
5）裝填好的重力柱可以直接加入平衡液進行平衡，暫不使用時則加入保護液，4-30℃保存。
2.2.2 層析柱的裝填
裝柱前根據層析柱直徑計算柱子底面積，根據所需裝柱高度計算所需介質體積，公式如下∶
V=1.15mh
V∶所需介質體積 ml 1.15∶壓縮系數r∶柱管半徑 cm h∶裝填高度 cm
注意∶介質實際體積占所取懸液總體積的 75%。
1）用去離子水沖洗層析柱底篩板與接頭，確保柱底篩板上無氣泡，關閉柱底出口，并在柱底部留出1-2cm 的去離子水。2）將填料懸浮起來，小心的將漿液連續地倒入層析柱中。用玻璃棒沿著柱壁倒入漿液可減少氣泡的產生。
3）如果使用儲液器，應立即在層析柱和儲液器中加滿水，將進樣分配器放置于漿液表面，連接至泵上，避免在分配器或進樣管中產生氣泡。4）打開層析柱底部出口，開啟泵，使其在設定的流速下進行。最初應讓緩沖液緩慢流過層析柱，然后緩慢增加至最終流速，這樣可避免液壓對所形成柱床的沖擊，也可以避免柱床形成的不均勻。如果達不到推薦的壓力或流速，可以用你所使用泵的流速，這樣也可以得到一個很好的裝填效果。（注意∶在隨后的色譜程序中，不要超過裝柱流速的75%）當柱床高度穩定后，在最后的裝柱流速下至少再上3 倍柱床體積的去離子水。標上柱床高度。5）關閉泵，關閉層析柱出口。
6）如果使用儲液器，去除儲液器，將分配器置于層析柱中。
7）將分配器推向柱子至標記的柱床高度處。允許裝柱液進入分配器，鎖緊分配器接頭。8）將裝填好的層析柱連接至泵或色譜系統中，開始平衡。如果需要可以重新調整分配器。
3.純化流程
所用水和緩沖液在使用之前建議用0.22 μm 或0.45 um 濾膜過濾。
平衡液為蛋白純化后，用干保護蛋白的溶液（例如;PBS等），根據客戶需求自行選擇。
3.2 樣品準備
樣品在上樣前建議離心或用0.22 μm 或0.45 μm 濾膜過濾，減少雜質，防止堵塞柱子。
3.3 樣品純化1平衡
上樣之前，用平衡液至少平衡 5-10個柱體積，或直到基線穩定。含去垢劑的溶液可能需要平衡更長時間。2）上樣和洗脫
推薦上樣體積為柱體積的 10%以內。脫鹽時樣品量可至 30%柱體積。使用重力柱純化時。待樣品進入填料后，繼續加入平衡液進行洗
脫，使用預裝層析柱純化時，可以通過上樣管或樣品環來上樣。分管收集洗脫液，樣品進入填料開始，按昭固定體積（例如 1ml/管）收集
樣品，檢測每管蛋白濃度和鹽濃度，計算回收率和脫鹽效率。預裝層析柱純化流速不能超過裝柱流速的 70%。
凝膠過濾是一種非吸附性色譜技術，所有的樣品物質都應在一個柱體積之內洗脫出來。完成一次操作后，如仍用同一種緩沖液，色譜柱不需要再平衡。3）再生
再生通常用水沖洗2 倍柱體積，然后用緩沖液沖洗2-3倍柱體積，如果不立刻使用，則用20%乙醇平衡后，4-30℃C保存。對不同的樣品，建議大約5次循環后，采用完整的在位清洗（CIP）。
4.清洗及保存
在位清洗∶為除去變性蛋白或脂肪，有時需要對脫鹽柱進行原位清洗。常用的清洗液為0.1-0.2 M NaOH 或非離子型去垢劑。
1）加入一倍的柱體積0.1-0.2 M NaOH，依靠重力或者低流速清洗介質。
2）用足夠量的去離子水，沖洗介質，直至 pH 值至中性。
3）用至少三倍柱體積 20%乙醇溶液沖洗介質，然后做好色譜柱的密封，置于2-8℃保存。
注∶不建議介質多次重復再生和使用。
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