天根 KR211
miRcute增強型miRNA cDNA鏈合成試劑盒

miRcute增強型miRNA cDNA鏈合成試劑盒采用加A法來進行miRNA鏈cDNA的反轉錄。本試劑盒采用了雙組分形式,簡化了實驗操作流程,降低了操作失誤的可能性。 本產品中的miRNA RT Enzyme Mix包含了E.coli Poly(A) Polymerase、RTase和RNasin,其中的E.coli Poly(A) Polymerase不但具有高效的加A尾效率,還可特異性識別單鏈 miRNA,避免了具有雙鏈結構的miRNA前體的進一步逆轉錄反應;RTase經過分子改造,去掉了RNase H活性,增加了RNA模板親和力,從而使得miRNA的逆轉錄反應具有更 高的效率和靈敏度。本產品中的2× miRNA RT Reaction Buffer包含了miRNA加A尾反應和逆轉錄反應的所有原料和引物,并經過精心優化,可保證miRNA 3'末端的Poly(A)修飾過程和 逆轉錄過程同時高效進行。

1. 省時省力。本試劑盒將miRNA的加A尾反應和逆轉錄反應合二為一,在減少操作步驟的同時也節省了一半的反應時間。另外,本試劑盒為雙組分形式,操作過程中只需加入RNA模板和兩個組分即可進行miRNA的逆轉錄反應,進一步簡化了操作。
2. 特異性強。本試劑盒中的E.coli Poly(A) Polymerase和RTase都只針對單鏈的miRNA進行修飾和逆轉錄反應,可避免具有二級結構的miRNA前體進行逆轉錄反應。
3. 靈敏度高。本試劑盒通過將加A尾反應和逆轉錄反應的整合,實現了miRNA的加A產物可全部進行進一步的逆轉錄反應,大大提高了低豐度miRNA的檢出率。
4. 適用廣泛。本試劑盒可針對幾乎所有材料提取的miRNA進行逆轉錄反應,模板的使用范圍可達20 pg-2 μg(質量范圍)和10 fM-100 pM (濃度范圍)。

染料法/探針法miRNA的熒光定量研究
本試劑盒須與miRcute Plus miRNA熒光定量檢測試劑盒(FP411)配套使用
圖1. 使用TIANGEN miRcute增強型miRNA cDNA 鏈合成試劑盒(KR211)分別與國外Q公司(左)和國內T公司(右)的同類產品反轉錄人類miRNA mimics mix,之后用熒光定量檢測
hsa-miR-133a-3p。結果顯示,對于同一RNA樣本,與競品(藍色線)相比TIANGEN KR211(紅色線)反轉錄之后得到的cDNA量更大。KR211具有更高的反轉效率。miRNA mimics mix上樣量:2×108 copies;反轉錄體系:20 μl,取2 μl定量;定量試劑:TIANGEN miRcute增強型miRNA熒光定量檢測試劑盒(SYBR Green)(FP411);使用儀器:ABI 7500 fast。
圖2. 使用TIANGEN miRcute增強型miRNA cDNA第一鏈合成試劑盒(KR211,上排)與國外Q公司(下排)的同類產品分別反轉錄人類Total RNA,之后 用熒光定量檢測hsa-miR-122-5p。結果顯示,對于同一RNA樣本,與競品相比TIANGEN KR211具有更高的靈敏度和穩定性,更適合下游實驗。Human Huh7細胞Total RNA提取采用TRNzol Universal(DP424)。反轉錄上樣量:100 ng-1 pg;反轉錄體系:20 μl,取2 μl 定量;定量試劑:TIANGEN miRcute增強型miRNA熒光定量檢測試劑盒(SYBR Green)(FP411);使用儀器:ABI 7500 fast。

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天根的產品線包括基因組DNA提取,RNA提取,質粒提取,DNA產物純化和凝膠回收,PCR/RT-PCR及qPCR產品,表觀遺傳學相關(miRNA提取及檢測試劑盒和甲基化相關試劑盒),二代測序(NGS)文庫構建產品和科技服務,克隆和點突變產品,無細胞蛋白表達,蛋白質檢測相關產品。還提供實驗室常用儀器和自動化工作站,自動化核酸提取儀及配套試劑,開放式主流自動化核酸提取平臺的整合方案。
天根的產品廣泛應用于生命科學、醫學、農業、制藥、環境等領域的基礎研究。客戶遍布大學、研究所、醫院、檢驗所、血站、出入境檢驗檢疫等單位。
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