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非洲豬瘟檢測(cè)試劑盒廠家選擇風(fēng)途可不錯(cuò)哦

閱讀:511      發(fā)布時(shí)間:2021-7-26
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  非洲豬瘟檢測(cè)試劑盒廠家【Abakora ibicuruzwa byo muri Afurika byingurube】非洲豬瘟檢測(cè)試劑盒生產(chǎn)廠家選擇風(fēng)途,型號(hào)為FT-ZWSJ2

  非洲豬瘟是一種非洲豬瘟屬病毒,病毒粒子為20面體對(duì)稱,直徑約200mm。病毒帶有囊膜,分為22個(gè)不同基因型,只有1個(gè)不同的血清型。非洲豬瘟在生豬和野豬的白細(xì)胞都可復(fù)制,尤其是養(yǎng)殖生豬。因?yàn)榉侵挢i瘟病例發(fā)生在1921年的肯尼亞,而后傳播到安哥拉、蘇丹、贊比亞等地,因此被稱為“非洲豬瘟"。非洲豬瘟有著高傳染性,豬群、野豬是主要傳播途徑,無(wú)法傳染給狗、貓、羊等動(dòng)物,人也不會(huì)傳染。不過(guò),DNA病毒在兔子體內(nèi)盲傳26代,對(duì)豬依然有致死性。該病有無(wú)季節(jié)性、無(wú)日齡性特點(diǎn),全年均可出現(xiàn),一旦患病將快速傳播導(dǎo)致生豬大批量死亡,健康的生豬感染病毒將迅速暴發(fā)。

非洲豬瘟檢測(cè)試劑盒

  非洲豬瘟病毒熒光PCR核酸檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)

  【獸藥名稱】

  通用名稱:非洲豬瘟病毒熒光PCR核酸檢測(cè)試劑盒

  漢語(yǔ)拼音:Feizliouzhuwen Bingdu Yingguang PCR Hesuan Jianceshijihe

  英文名稱:African swine Fever Virus (ASFV) PCR Nucleic Acid Diagnostic Kit

  商品名稱:無(wú)

  【主要成分與含量】試劑盒中含有如下組分:

試劑盒組分

含量

陽(yáng)性對(duì)照

250μL/管×1管


陰性對(duì)照

250μL/管×1管


PCR反應(yīng)液

850μL/管×1管


萌混合液

150μL/管×1管


說(shuō)明書(shū)

1份/盒

【作用與用途】 本試劑盒可用于血液、脾臟、肝臟、淋巴結(jié)、  樣品中非洲豬瘟病毒核酸的檢測(cè)。

扁桃體、腎臟、肌肉、環(huán)境樣品等

  【用法與判定】

  1 用法

  1.1待檢樣品釆集、保存及運(yùn)輸

  1.1.1樣品釆集

  (1) 活豬樣品 無(wú)菌采集抗凝血或血清5mL

  (2) 病死豬剖檢樣品或屠宰場(chǎng)剖檢樣品 無(wú)菌采集死豬的牌、肺、腎、扁桃體、淋巴結(jié)、肌肉等組織樣品。2?8°C低溫運(yùn)至實(shí)驗(yàn)室用于檢測(cè)。

  (3) 病豬污染的周邊環(huán)境 采集與病豬相關(guān)場(chǎng)所的糞便、飼料、污水樣品。2?8°C低溫運(yùn)至實(shí)驗(yàn)室用于檢測(cè)。

  1.1.2樣品保存 采集的樣品在2?8°C保存應(yīng)不超過(guò)24小時(shí),-70°C條件下保存,避免反復(fù)凍 融。

  1.1.3樣品運(yùn)輸泡沫箱加冰袋后密封進(jìn)行運(yùn)輸。包裝和運(yùn)輸應(yīng)符合《高致病性動(dòng)  物病原微生物菌(毒)種或者樣品運(yùn)輸包裝規(guī)范》和關(guān)于危險(xiǎn)品運(yùn)輸管理的有關(guān)規(guī)定。

  1.2樣品處理

  1.2.1血液樣品處理 抗凝血樣品置于離心管中,8000 r/min離心2分鐘取上層血漿,編號(hào)待 檢。非抗凝血樣品置于離心管中,待凝固后,8000  r/min離心2分鐘取200μL上層血清,編號(hào)待檢。

  1.2.2組織樣品處理取適量脾臟、肝臟、淋巴結(jié)、扁桃體、肌肉等組織,置于研磨器或研磨管中研磨,再加適量生理鹽水混勻,制成約10%的組織勻漿,8000  r/min離心2分鐘,取200μL上 清于RNase/DNase-free無(wú)菌離心管中,編號(hào)備用。

  1.2.3環(huán)境樣品處理

  1.2.3.1糞便、飼料樣品處理方法取適量的糞便、飼料放入盛有PBS緩沖液的研磨管中研磨混勻,制成約10%的勻漿液.8000  r/min離心2分鐘,取200μL上清于RNase/DNase-free無(wú)菌離心 管中,編號(hào)備用。

  1.2.3.2污水樣品處理方法 直接取200μL污水進(jìn)行核酸提取。

  1.3病毒核酸的提取用磁珠法或柱式法進(jìn)行DNA核酸提取。

  1.4熒光PCR反應(yīng):

  1.4.1從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液、酶混合液,室溫融化后,2000 r/min離心5秒。設(shè)被  檢樣品、陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照總和為n,則反應(yīng)體系配制如下:

  試劑 體系

  PCR 反應(yīng)液 17× (n+1) μL

  酶混合液 3× (n+1) μL

  1.4.2在新的RNase/DNase-fire 1.5 ml離心管中加入上述試劑,充分混勻后瞬時(shí)離心。按照20μL/  管分裝量將試劑分裝至熒光PCR反應(yīng)管。

  1.4.3在上述制備好的熒光PCR反應(yīng)管中分別加入陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照各5μL、處理好的待測(cè)核酸各5μL,終體積25μL/管,蓋好熒光PCR反應(yīng)管蓋,混勻后瞬時(shí)離心,轉(zhuǎn)移到熒光PCR儀器  上。

  144將PCR反應(yīng)管放置在熒光PCR儀樣品槽中,在熒光PCR儀上運(yùn)行以下程序:

步驟

條件

循環(huán)數(shù)

UNG處理

50 ℃, 2分鐘

1

預(yù)變性

95 ℃, 3分鐘

1

預(yù)擴(kuò)增

95  ℃: 8 秒 55 ℃: 8 秒


5

PCR擴(kuò)増

95  ℃: 8 秒 55 ℃: 8 秒


40

  熒光通道選擇FAM,在PCR擴(kuò)增階段每個(gè)循環(huán)的55℃時(shí)采集熒光信號(hào)。設(shè)置擴(kuò)增體系為25μL, 同時(shí)要選擇passive  reference和quencher為none的模式。(注:若熒光PCR儀(如AB17500)按說(shuō)明  書(shū)中的反應(yīng)程序設(shè)置后因持溫時(shí)間短無(wú)法運(yùn)行,可將預(yù)擴(kuò)增和PCR擴(kuò)增條件變更為95C: 5秒 55°C: 30 秒)

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