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一、 儀器介紹
實驗目的：
確定重復接觸受試物對哺乳動物是否可引起皮膚反應及其程度
試驗概述：
局部封閉涂皮試驗（Buehler test，BT）和豚鼠最大值試驗（uinea pig maximisation test，GPMT）是實驗動物通過多次皮膚涂抹（誘導接觸）或皮內注射受試物10d~14d（誘導階段）后,給予激發劑量的受試物,觀察實驗動物,并與對照動物比較對激發接觸受試物的皮膚反應強度。
小鼠局部淋巴結分析試驗（locallymph node assay，LLNA）是通過耳部給予實驗動物受試物,引起淋巴結的淋巴細胞增生,淋巴細胞增生與受試物劑量（過敏程度）成比例。利用放射性標記方法,測定試驗組與對照組淋巴細胞的標記率,并進行對比,獲得刺激指數,評價致敏強度。
應用范圍：
應用于科研、農業、衛生、教育、霧霾狀態可吸入顆粒染毒效果研究等各個領域
符合標準：
GB/T 15670.9-2017《農藥登記毒理學試驗方法第9部分皮膚反應（致敏）試驗》
二、試驗步驟:
1. Buehler Test（BT）
動物模型:豚鼠
操作步驟:
誘導階段:通過封閉式皮膚涂抹受試物，持續10-14天。激發階段:間隔后再次涂抹受試物，觀察皮膚反應。
觀察指標:紅斑、水腫等皮膚炎癥反應的強度(主觀評分)
優點:
模擬人類皮膚接觸途徑，適用于局部制劑(如化妝品、外用藥物)
無需注射，操作相對溫和。0
缺點:
敏感性較低，可能漏檢弱致敏物，。依賴主觀評分，存在實驗者偏差。0應用場景:傳統化妝品、外用藥品的安全性評估。
2.豚鼠最大值試驗（GPMT）
動物模型:豚鼠
操作步驟:
誘導階段:皮內注射受試物（常聯合弗氏佐劑）結合皮膚涂抹，持續10-14天。
激發階段:再次涂抹受試物，評估皮膚反應。
觀察指標:與BT類似，但反應更強烈(紅斑、水腫、硬結)
優點:
敏感性高，可檢測強致敏物和弱致敏物;
“金標準"，尤其適用于化學品和工業原料。
缺點:
使用佐劑可能引發過度免疫反應，導致假陽性;
動物痛苦程度較高，倫理爭議較大。
應用場景:工業化學品、強致敏性物質(如染發劑、橡膠添加劑)的嚴格檢測。
3.小鼠局部淋巴結試驗（LLNA）
動物模型:小鼠.
操作步驟:
誘導階段:連續3天耳部涂抹受試物。
檢測指標:通過3H-胸苷或BrdU標記增殖的淋巴細胞，計算刺激指數（SI）觀察指標:淋巴結淋巴細胞增殖程度（SI>3判為陽性）
優點:
客觀定量:減少主觀評分誤差；
符合3R原則:動物用量少，無需激發階段，痛苦小;
高效快速:試驗周期短(約1周)。
缺點:
對某些物質(如金屬鹽)敏感性不足，需使用放射性物質或特殊設備，成本較高。
應用場景:歐盟等法規優先推薦的替代方法，廣泛用于藥品、化妝品及化工產品的初篩。
