本研究對攜帶SARS-CoV-2全長或截短S蛋白的G蛋白缺陷型水泡性口炎病毒(VSVdG)的假病毒包裝效率以及不同細胞系用于假型病毒包裝和感染的效率進行了評價。研究發現，VSV-SARS-CoV-2-Sdel18（C末端截短18個氨基酸的S蛋白）的病毒包裝和感染效率遠高于VSV-SARS-CoV-2-S。而在本研究所使用的細胞系中，穩定表達人ACE2的BHK21-hACE2對感染敏感，Vero-E6對感染也有中等程度的敏感性，BHK21細胞對假病毒幾乎不敏感。基于VSV-SARS-CoV-2-Sdel18假病毒和ACE2過表達BHK21細胞(BHK21-hACE2)，建立了抗體篩選和驗證的中和分析模型。通過對EGFP陽性的細胞進行計數指征假病毒的感染情況，從而保證了高通量檢測能力。研究表明，用VSV-SARS-CoV-2-Sdel18假病毒法測定19例恢復期患者血清中和效價，與SARS-CoV-2活病毒法測定結果有較好的相關性。同時評價了7種抗SARS-CoV-2-S受體結合區(RBD)中和小鼠單克隆抗體(mAbs)的中和活性。該模型的高效性可助力針對SARS-CoV-2的新藥和疫苗研發。
Opera Phenix系統作為本研究中的影像學數據采集和分析的工具，保障了模型的通量和篩選效率。
不同細胞系假病毒感染效率比較。比較攜帶SARS-CoV-2 S蛋白或VSV G蛋白的VSVdG病毒在Vero-E6、BHK21、293T和BHK21-hACE2細胞系中的感染效率。
VSVdG-SARS-CoV-2-Sdel18在不同細胞系中的包裝效率比較。A圖左為各細胞感染VSVdG-EGFP-G 48h后的情況。A圖右顯示了由三個細胞系產生的病毒的不同稀釋度在BHK21-hACE2細胞中的感染能力。B圖是A圖右對應的GFP陽性細胞計數結果。
監測VSVdG-SARS-CoV-2-Sdel18感染BHK21-hACE2細胞后不同時間點的EGFP表達情況。
基于VSVdG-SARS-CoV-2-Sdel18的單克隆抗體的中和篩選。將35株單克隆雜交瘤細胞培養上清與VSVdG-SARS-CoV-2-Sdel18病毒共同孵育，然后將混合液加入BHK21-hACE2細胞中。通過綠色陽性的細胞數的減少情況判斷抗體的中和效果。
7
立即詢價
您提交后，專屬客服將第一時間為您服務