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尿沉渣染色液(Sternheimer法)

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產(chǎn)品型號

品       牌其他品牌

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所  在  地上海市

更新時間:2022-05-16 14:05:22瀏覽次數(shù):420次

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貨號 FS-X9925
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產(chǎn)品介紹:

用途:

尿沉渣染色檢查

注意事項:

染色后紅細(xì)胞呈紅色或無色,白細(xì)胞呈深藍(lán)、淡藍(lán)或無色。

儲存條件:4℃,避光,12個月

中文名稱:尿沉渣染色液(Sternheimer法)

英文名稱:

產(chǎn)品規(guī)格:50ml|100ml

貨號:FS-X9925

實驗報告:

一、分離與培養(yǎng):

1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小;

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;

3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);

二、免疫熒光鑒定:

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;

2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;

5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞,細(xì)胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD)×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

培養(yǎng)操作步驟:

1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;

2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);

3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;

4.將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;

5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

污黑腐皮殼螺旋一環(huán)一螺旋蛋白5抗體Human GPR107 小鼠白活化黏附因子(ALCAM)免疫試劑盒

綠色鏈霉菌二磷3核抗體Human GPR108 小鼠白三烯E4(LTE4)免疫試劑盒

微小桿菌腦蛋白絲/蘇激29抗體Human GPR116(G-protein coupled receptor 116) 小鼠白三烯D4(LTD4)免疫試劑盒

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水溶性非食用色快速篩查盒生物抗體Human GP repeat 小鼠白三烯B4(LTB4)免疫試劑盒

蟬擬青霉Bax相互作用因子1抗體Human GPAA1 小鼠白介9(IL-9)免疫試劑盒

高地芽孢桿菌表皮生長因子反應(yīng)蛋白2抗體Human GPATCH2 小鼠白介8(IL-8/CXCL8)免疫試劑盒

平菇BCL2相關(guān)X蛋白抗體Human GPBP1 小鼠白介7(IL-7)免疫試劑盒

蠟樣芽孢桿菌Bcl2樣凋亡蛋白13抗體Human GPATCH4(G patch domain-containing protein 4) 小鼠白介6(IL-6)免疫試劑盒

金黃殼囊孢菌Bcl2樣凋亡蛋白14抗體Human GTF2A2 小鼠白介-5(IL-5)免疫試劑盒

斑玉蕈Bcl2蛋白修飾因子抗體Human GTF2E1 小鼠白介4(IL-4)免疫試劑盒

金針菇(毛柄金錢菌、冬菇)骨形態(tài)發(fā)生蛋白11抗體Human GTF2F1 小鼠白介35(IL-35)免疫試劑盒

大腸埃希菌BCL2樣15促凋亡蛋白抗體Human GSG1L 小鼠白介33(IL-33)免疫試劑盒

藍(lán)色犁頭霉骨堿性磷抗體Human GSDMD 小鼠白介31(IL-31)免疫試劑盒

葡萄座腔菌磷化T淋巴連接蛋白抗體Human GSPT1 小鼠白介3(IL-3)免疫試劑盒

金耳、 黃木耳磷化T淋巴連接蛋白抗體Human GSPT2 小鼠白介2受體β(IL2rb/CD122)免疫試劑盒

固氮菌Azotobacter│sp. 質(zhì)量規(guī)格:BRβ膠原交聯(lián)試劑盒人參皂Rk3

輪枝孢Verticillium│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>98.5%,BRβ-肌動蛋白試劑盒人參炔

詹氏桿菌Propionibacterium│jensenii 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BRβ-黑色激試劑盒肉豆寇單甘油酯
尿沉渣染色液(Sternheimer法)云芝栓孔 (變色栓) 十八烷基乙烯基尿鎘-金屬硫蛋白

假單胞 3-硝基-4-羥氨基氨基肽

羅伊氏乳桿 二乙二單乙烯基補體因子H相關(guān)蛋白3

大斑凸臍蠕孢 4-(3-吡啶基)苯頻哪酯磷糖異構(gòu)1

喜乳糖擬泡囊擔(dān)孢酵母 7-氨基庚白分化抗原CD109

谷棒桿Ⅲ型 3-溴-6--2-吡啶甲球蛋白重鏈可變區(qū)

大腸埃希 順-2-已烯-1-Igκ鏈V-I區(qū)HK102

黑附球 3-甲基-2-硝基三氟甲苯凝膠溶

無花果曲霉 叔丁基二苯基硅烷基三氟甲磺酯α黑色

銹赤蠟黃鏈霉 3-溴-5-三氟甲苯受體相互作用蛋白

膜醭假絲酵母 5-溴-2--3-吡啶CXC趨化因子受體7

堿線屬 3-羥基十六烷CXC趨化因子受體4

Rhizobium multihospitium  基溴化鎂(約的四溶液,約2mol/L)14-3-3蛋白beta

甘蔗生節(jié)棱孢 4--1-14-3-3蛋白gamma

根瘤 3-羥基-2-萘甲酰基-鄰-乙氧基苯14-3-3epsilon

 


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