實時熒光定量PCR：
實時熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點(diǎn)檢測的局限，實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強(qiáng)度，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個樣品Ct值的計算，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得定量結(jié)果。因此，實時熒光定量PCR無需內(nèi)標(biāo)是建立在兩個基礎(chǔ)之上的：
1）Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達(dá)Ct值所在的循環(huán)數(shù)時，剛剛進(jìn)入真正的指數(shù)擴(kuò)增期（對數(shù)期），此時微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現(xiàn)性，即同一模板不同時間擴(kuò)增或同一時間不同管內(nèi)擴(kuò)增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關(guān)系，可利用標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知樣品進(jìn)行定量測定，因此，實時熒光定量PCR是一種采用外標(biāo)準(zhǔn)曲線定量的方法。
外標(biāo)準(zhǔn)曲線的定量方法相比內(nèi)標(biāo)法是一種準(zhǔn)確的、值得信賴的科學(xué)方法。利用外標(biāo)準(zhǔn)曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量最準(zhǔn)確，重現(xiàn)性*定量方法，已得到的*，廣泛用于基因表達(dá)研究、轉(zhuǎn)基因研究，藥物療效考核、病原體檢測等諸多領(lǐng)域。
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參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：貓衣原體（CP）核酸檢測試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格：50T
產(chǎn)品貨號：FS-P10347
產(chǎn)品分類：熒光PCR法
產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
儲存條件：-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。
運(yùn)輸：低溫、避光，快遞免費(fèi)送貨上門。
產(chǎn)品特點(diǎn)：
本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計引物而開發(fā)的高靈敏 PCR檢測試劑盒 。
實驗過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟 
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）    1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
定量PCR方法：
a、競爭法
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個新內(nèi)切位點(diǎn)的外源競爭性模板。在同一反應(yīng)管中，待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴(kuò)增（其中一個引物為熒光標(biāo)記）。擴(kuò)增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物，競爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個片段，而待測模板不被酶切，可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開，分別測定熒光強(qiáng)度，根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù)。
b、內(nèi)參照法
在不同的PCR反應(yīng)管中加入已定量的內(nèi)標(biāo)和引物，內(nèi)標(biāo)用基因工程方法合成。上游引物用熒光標(biāo)記，下游引物不標(biāo)記。在模板擴(kuò)增的同時，內(nèi)標(biāo)也被擴(kuò)增。在PCR產(chǎn)物中，由于內(nèi)標(biāo)與靶模板的長度不同，二者的擴(kuò)增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來，分別測定其熒光強(qiáng)度，以內(nèi)標(biāo)為對照定量待檢測模板。
c、PCR－ELISA法
利用di高辛或生物素等標(biāo)記引物，擴(kuò)增產(chǎn)物被固相板上特異的探針?biāo)Y(jié)合，再加入抗di高辛或生物素酶標(biāo)抗體－辣根過氧化物酶結(jié)合物，最終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR－ELISA法只是定性實驗，若加入內(nèi)標(biāo)，作出標(biāo)準(zhǔn)曲線，也可實現(xiàn)定量檢測目的。
PCR的反應(yīng)條件：
因擴(kuò)增片段的大小、反應(yīng)體積、使用擴(kuò)增儀器的不同而不同。
◇ 循環(huán)次數(shù)
根據(jù)模板DNA的量以及擴(kuò)增片段的大小，設(shè)定25～30個循環(huán)。
如果循環(huán)次數(shù)太少，擴(kuò)增量不足；如果循環(huán)次數(shù)太多，則會出現(xiàn)Smear。
◇ Anneal以及Extension
合適的Anneal溫度通常在45～68℃之間 (預(yù)備實驗可2℃間隔進(jìn)行)。另外，由于在60～68℃間，也有很高的活性, 因此可在此溫度范圍內(nèi)設(shè)定Anneal-Extension溫度, 進(jìn)行2 Step PCR。Anneal-Extension溫度為68℃ 時，每kbp大體可設(shè)定30秒～1分鐘；當(dāng)溫度設(shè)定在68℃以下時, 時間設(shè)定可稍長一些。通常，Anneal溫度太高，有時會得不到擴(kuò)增產(chǎn)物；Anneal溫度太低時，容易發(fā)生非特異性反應(yīng)。另外，Extension時間太短時，會得不到擴(kuò)增產(chǎn)物或者會有一些短的非特異性產(chǎn)物優(yōu)成；而Extension時間太長時，會出現(xiàn)Smear。
銅綠假單胞菌培養(yǎng)基: 00022-酮基-L-古龍?zhí)峁┬问? 凍干物安全等級: 2模式菌株: no生長條件: 30℃ 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法

肉灰色鏈霉菌培養(yǎng)基: CM0012產(chǎn)生Hydroxystreptomycin羥基鏈霉素提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no生長條件: 28C 真空冷凍干燥

針層孔菌培養(yǎng)基: 0014模式菌株: no植物提供形式: 凍干物安全等級: 1生長條件: 25℃ 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法

 -370℃冰箱凍結(jié)；真空冷凍干燥

 ATCC23218=CCM2713=CIP107115=DSM43111=IAM14287模式菌株模式菌株: yes種屬: Nocardiopsis│dassonvillei subsp. dassonvillei提供形式: 凍干物安全等級: 1培養(yǎng)基: 0038生長條件: 28℃

圣格奧爾根菌培養(yǎng)基: 38模式菌株: yes鹽礦沉積物提供形式: 凍干物安全等級: 1生長條件: 28℃ 真空冷凍干燥法；礦物油法；定期移植法

普拉霍瓦富鹽菌菌紅素產(chǎn)生菌模式菌株: no鹽池黑底泥提供形式: 凍干物安全等級: 1培養(yǎng)基: 952生長條件: 37℃

匍枝根霉生長條件: 25℃培養(yǎng)基: 0014提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no

大腸埃希氏菌動物疫苗模式菌株: no肉雞大腸提供形式: 斜面培養(yǎng)物；凍干物安全等級: 1培養(yǎng)基: 33生長條件: 37℃

 M15布氏P.I.抗原用于人　　粗糙　　　　突變株,強(qiáng)株模式菌株: no種屬: Brucella│melitensis提供形式: 凍干物安全等級: 3培養(yǎng)基: CM0112生長條件: 37℃

 -371℃冰箱凍結(jié)；真空冷凍干燥

蘇云金芽孢桿菌培養(yǎng)基: 266模式菌株: no土壤提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1生長條件: 28-30℃ 真空冷凍干燥法

優(yōu)雅食烷菌有機(jī)污染物降解菌/石油烴類降解菌模式菌株: no水樣/上層海水提供形式: 凍干物安全等級: 1培養(yǎng)基: 472生長條件: 25℃

擬諾卡氏菌屬菌種抗真菌；抗大腸桿菌模式菌株: no土壤提供形式: 凍干物安全等級: 1培養(yǎng)基: CM0027生長條件: 28C

釀酒酵母培養(yǎng)基: CM0077啤酒。提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no生長條件: 28℃ 真空冷凍干燥法

同溫層芽孢桿菌潛在的生物活性微生物/軟珊瑚共附生菌，用于篩選活性物質(zhì)產(chǎn)生菌 產(chǎn)酶微生物/淀粉酶、脂酶（三丁甘油酯）、纖維素酶模式菌株: no生物樣/軟珊瑚提供形式: 凍干物安全等級: 1培養(yǎng)基: 471生長條件: 28℃

草銨Oxalic acid diammonium saltAR500g

SCT-150-SS-C-S1.5 ml 螺口可立凍存管(無色)(已滅菌)(帶蓋)91

0691-500GD-Sorbitol D-山梨醇50-70-4500g

DAB Horseradish Peroxidase Color Development Kit200ml

縮節(jié)胺(助壯素)500g

二乙二醇DiglycolGC2ml

SM0643O`RangeRuler 500bp DNA Ladder, ready-to-use191

B0588-1KGBoric Acid 硼10043-35-31kg

檸檬250g

X-Gal10g

大鼠血小板因子4(PF-4/CXCL4)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

人腺病IgM(ADV-IgM)免疫試劑盒 Human adenovirus(ADV)aibody(IgM)ELISA kit

單脫氫抗壞血還原酶(MDHAR)測試盒 紫外分光光度法 50管/48樣

Ratmonocytechemotacticprotein4,MCP-4ELISA試劑盒大鼠單核趨化蛋白4(MCP-4/CCL13)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

humanhepatitisBvirus,HBVpreS2AbELISA試劑盒人乙型肝炎病前S2抗體(HBVpreS2Ab)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

Humanlow-densitylipoprotein-receptor-relatedprotein,LRP-6ELISAKit人低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白6(LRP-6)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
貓衣原體（CP）核酸檢測試劑盒葡萄糖肉湯規(guī)格：250g用途：用于營養(yǎng)苛求菌培養(yǎng)和腸道菌產(chǎn)氣實驗

1/2B5培養(yǎng)基（不含瓊脂和蔗糖）規(guī)格：250g用途：用于植物組織培養(yǎng)（不含瓊脂和蔗糖）

大腸菌群快檢紙片(生活飲用水)規(guī)格：5份/包用途：用于生活飲用水檢驗

PEA 瓊脂規(guī)格：250g用途：用于從含革蘭氏陰性菌的標(biāo)本中分離培養(yǎng)革蘭氏陽性菌

酪蛋白葡萄糖肉湯規(guī)格：250g用途：用于霉菌、酵母菌等的增菌培養(yǎng)

OADC添加劑規(guī)格：用途：用于添加于Middle