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Masson三色染色液(固綠法)

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所  在  地上海市

更新時間:2022-05-16 14:30:01瀏覽次數:158次

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貨號 FS-X9960
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phospho-PAK1(Ser144) 化p21

中文名稱:Masson三色染色液(固綠法)

英文名稱:

產品規格:7×50ml|7×100ml

貨號:FS-X9960

產品介紹:

用途:

經典膠原纖維染色,可區分膠原纖維和肌纖維。

注意事項:

染核后能更容易區分膠原纖維和肌纖維,本試劑盒采用經典的Weigert蘇木素。其結果為:膠原纖維呈藍色,胞核呈藍褐色肌纖維、紅細胞等呈紅色。

儲存條件:室溫,避光,12個月

培養操作步驟:

1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;

2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養板(每孔一片)或培養皿中(每個平皿可放置2-3片);

3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;

4.將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中,使蓋玻片*浸在培養液中;

5.將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時,將培養板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

實驗報告:

一、分離與培養:

1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小;

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置;

3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養;

5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養;

二、免疫熒光鑒定:

1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;

2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;

5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數目,需根據細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.

2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。

8、結果分析

a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

青榨槭葉斑病16號染色體開放閱讀框7抗體Human EIF1 兔基質衍生因子-1(SDF-1/CXCL12)免疫試劑盒

多根硬皮馬勃16號染色體開放閱讀框57抗體Human EFHC1 兔基質金屬蛋白2/明膠A(MMP-2/Gelatinase A)免疫試劑盒

大腸桿菌3號染色體開放閱讀框37抗體Human EFS 兔基質金屬蛋白1(MMP-1)免疫試劑盒

葡枝根霉3號染色體開放閱讀框49抗體Human EFHD1 兔環磷腺(cAMP)免疫試劑盒

多主葡萄殼菌1號染色體開放閱讀框220抗體Human EFTUD1 兔核因子κB受體活化因子配基(RANKL)免疫試劑盒

銅綠假單胞菌鈣磷蛋白1抗體Human EFTUD2 兔過氧化物體增殖因子活化受體γ(PPAR-γ)免疫試劑盒

孟氏假單胞菌鈣磷蛋白2抗體Human ECD 兔過氧化物體增殖物激活受體γ(PPARG)免疫試劑盒

青霉磷化通道相互作用蛋白3抗體Human EEF1D 兔過氧化物體增殖物激活受體β(PPARβ)免疫試劑盒

劉志恒氏菌16號染色體開放閱讀框61抗體Human ECE2 兔過氧化物體增殖物激活受體α(PPARA)免疫試劑盒

嗜熱鏈球菌視錐感光環磷鳥門控通道蛋白CNG3抗體Human EEF1E1 兔骨橋(OPN)免疫試劑盒

地衣芽孢桿菌環核門控陽離子通道蛋白β3/CNG-β3抗體Human ECEL1 兔骨鈣/骨谷蛋白(OT/BGP)免疫試劑盒

淤泥金黃桿菌非受體酪激c-Abl抗體Human ECHS1 兔骨保護(OPG)免疫試劑盒

葡萄座腔菌屬卷曲螺旋結構域蛋白152抗體Human EEF1G 兔鉤端螺旋體IgG(Lep IgG)免疫試劑盒

綠色木霉甘油二酯磷轉移抗體Human ECH1 兔干擾誘導蛋白10(IP-10/CXCL10)免疫試劑盒

無色殼囊孢嗜鉻粒B抗體Human DR3 兔鈣結合蛋白(CALB2)免疫試劑盒

貝倫格葡萄座腔菌梨生專化型血管加壓激活鈣啟動受體蛋白1抗體Human ECM2 兔兒茶(CA)免疫試劑盒

金針菇Flammulina│velutipes 質量規格:>98%,BRS100鈣結合蛋白A6/鈣粒蛋白A試劑盒化天竺葵

紅栓菌Trametes│cinnabarina (Jacq.: Fr.) Fr. 質量規格:BRS100鈣結合蛋白A12/鈣粒蛋白C試劑盒硫

: ivcas7.00750資源名稱: 蘇云金芽孢桿菌 質量規格:>99%,BRS100鈣結合蛋白A11試劑盒藍萼
Masson三色染色液(固綠法)釀酒酵母 1,3-二溴-4,6-二氟苯葡萄糖

大腸埃希 甘油磷絲裂原激活蛋白激激6

枯草芽孢桿枯草亞種 4-溴-2,5-二氟孤兒G蛋白偶聯受體

木耳Au888 3-溴-2,6-二氟受體自身IgG抗體

彩色豆馬勃 2,4,6-三氟受體自身IgM抗體

暗擬莖點霉* 1-乙基吡唑受體自身IgA抗體

黑曲霉 3,5-二硝基-2-甲D-精

圍小叢殼 2-溴-6-甲氧基CD45分子

球孢白僵 (R)-(-)-1-氨基-2-酰基脫氫

枯草芽孢桿 4-乙氧基二苯甲酮長鏈脂酰基coA脫氫

青霉屬 2-氨基-,4-萘醌沙眼衣原體抗體

耐堿馬賽 4,4'-聯吡啶阿黑皮原

炭黑曲霉 3,5-二膀胱腫瘤抗原

黑附球 (R)-1-BOC-3-羥甲基哌腺環化關聯蛋白2

八孢裂殖酵母 5-苯并噻唑羧肽E

 


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