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線蟲活體染色液(碘法)

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所  在  地上海市

更新時間:2022-05-16 16:27:16瀏覽次數:203次

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貨號 FS-X10166
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培養操作步驟:

1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;

2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養板(每孔一片)或培養皿中(每個平皿可放置2-3片);

3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;

4.將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中,使蓋玻片*浸在培養液中;

5.將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時,將培養板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

中文名稱:線蟲活體染色液(碘法)

英文名稱:

產品規格:100ml

貨號:FS-X10166

產品介紹:

用途:

主要用于觀察植物組織內部的線蟲,特別是根內線蟲材料。

注意事項:

主要由碘等組成。

儲存條件:室溫,避光,12個月

實驗報告:

一、分離與培養:

1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小;

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置;

3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養;

5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養;

二、免疫熒光鑒定:

1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;

2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;

5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

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鏈霉菌Streptomyces│sp. 質量規格:1000μg/ml in 10% HCl金合歡;槐

曲霉Aspergillus│oryzae 質量規格:1000μg/ml,基體:1mol/L HNO3大黃-8-O-葡萄糖

: AS3.3390資源名稱: 淡紫犁頭霉 質量規格:100µg/ml,,基體:1%HNO3正丁基酞;丁基酞內酯
線蟲活體染色液(碘法)農研所芽孢桿 2-苯氧基吡啶25羥基維生D3

葡萄生擬莖點霉 四-(4-)乙烯3,4二羥基

芽孢桿屬 2-氨基-3-甲氧基吡4-羥基壬烯

釀酒酵母 6-羥基-4-嘧啶5羥基乙

釀酒酵母 己5羥色

枯草芽孢桿 縮二乙5-羥色受體7

吉氏芽孢桿 1-己基吡啶四氟鹽6酮前列腺F1α

不動桿 4-吡啶-2,6-二羧8羥基脫氧鳥

芽胞桿 4-乙氧基-2-氟苯8異前列腺

枯草芽孢桿斯氏亞種 2,5-雙(錫烷基)噻吩并[3,2-b]噻吩8-異前列腺F2α

脫葉鏈霉 甘氨酰-L-天冬Ⅰ型膠原C端肽

新月彎孢 7-氮雜-3-甲Ⅰ型膠原N末端肽

巴斯德畢赤酵母 2-溴噻唑-5-甲Ⅰ型膠原α1鏈

漢遜德巴利酵母 5-溴-3,4-二Ⅰ型膠原吡啶交聯終肽

曲霉 2-氨基-4-甲基噻吩-3-甲Ⅱ型肺泡表面抗原
操作規程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數目,需根據細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.

2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。

8、結果分析

a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

 


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