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當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>細(xì)胞組織染色>> 線蟲(chóng)活體染色液(多色藍(lán)法)
貨號(hào) | FS-X10164 |
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產(chǎn)品介紹:
用途: 利用根據(jù)線蟲(chóng)在固定時(shí)體內(nèi)各器官的氫離子濃度和生理狀態(tài)不同,可區(qū)分線蟲(chóng)和植物組織,游離的線蟲(chóng)經(jīng)過(guò)染色后內(nèi)部器官染成不同顏色,便于觀察識(shí)別,主要用于觀察游離線蟲(chóng)的染色 注意事項(xiàng): 主要由次甲藍(lán)、乙醇、蒸餾水等組成 儲(chǔ)存條件:室溫,避光,12個(gè)月 |
中文名稱(chēng):線蟲(chóng)活體染色液(多色藍(lán)法)
英文名稱(chēng):
產(chǎn)品規(guī)格:50ml|100ml
貨號(hào):FS-X10164
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
球孢白僵菌成纖維生長(zhǎng)因子受體1原癌基因伴侶蛋白抗體Human ZKSCAN1 雞抗凝血Ⅲ(AT-Ⅲ)抗體免疫試劑盒
QT6 鈣粘蛋白家族成員7抗體Human ZC3HC1 雞抗鏈球菌溶血O(ASO)抗體(IgM)免疫試劑盒
香菇Ⅲ型纖維連接蛋白域蛋白2/5抗體Human ZCCHC11 雞抗鏈球菌溶血O(ASO)抗體(IgG)免疫試劑盒
磚紅鐮刀菌細(xì)絲蛋白A抗體Human ZFP36L2 雞抗肌內(nèi)膜抗體IgA(EMA IgA)免疫試劑盒
馬賽菌磷化細(xì)絲蛋白A抗體Human ZFP64 雞巨噬替代激活相關(guān)化學(xué)因子1(AmAC-1)免疫試劑盒
科羅拉多擬無(wú)枝菌磷化細(xì)絲蛋白A抗體Human ZNF703 雞窖蛋白Caveolin-1(CAV1)免疫試劑盒
粟酒裂殖酵母DNA損傷修復(fù)基因XRCC9抗體Human MCPIP(Monocyte Chemoattractant Protein-induced Protein 1) 雞降鈣(CT)免疫試劑盒
長(zhǎng)根小奧德蘑鱗柄變種磷化細(xì)絲蛋白A抗體Human ZNF711 雞堿性成纖維生長(zhǎng)因子(bFGF)免疫試劑盒
大腸埃希氏桿菌磷化磷神經(jīng)膜抗體Human ZNF597 雞甲狀腺(T4)免疫試劑盒
釀酒酵母磷化堿性成纖維生長(zhǎng)因子受體1抗體Human ZNF71 雞甲狀旁腺激(PTH)免疫試劑盒
德?tīng)柌加墟呓湍噶谆咨窠?jīng)膜抗體Human ZNF486 雞低密度脂蛋白(VLDL)免疫試劑盒
釀酒酵母叉頭蛋白N1抗體Human ZNF600 雞激敏感性脂肪(HSL)免疫試劑盒
腐殖質(zhì)鏈霉菌磷化DNA損傷修復(fù)基因XRCC9抗體Human ZNF488 雞基質(zhì)金屬蛋白2(MMP-2)免疫試劑盒
絲衣霉菌Ⅲ型纖維連接蛋白域蛋白1抗體Human ZNF496 雞基質(zhì)金屬蛋白1(MMP-1)免疫試劑盒
美澳型核果褐腐病菌Ⅲ型纖維連接蛋白域蛋白8抗體Human ZFP36L1 雞肌紅蛋白(MYO/MB)免疫試劑盒
阿克蘇海洋桿菌Ⅲ型纖維連接蛋白域蛋白3B抗體Human TMPRSS4(Transmembrane protease serine 4) 雞肌動(dòng)蛋白,質(zhì)1(ACTB)免疫試劑盒
馬腺疫鏈球菌獸疫亞種Streptococcus│equi subsp.zooepidemicus 質(zhì)量規(guī)格:1000µg/mL,基體:10%HCl11-羥基柳杉
黃綠蜜環(huán)菌Armillaria│mellea 質(zhì)量規(guī)格:1000μg/ml,基體:0.1mol/LNaOH3β-乙酰氧基-7,25-甘遂二烯-24
: CMCC44102資源名稱(chēng): 大腸埃希氏菌(大腸桿菌) 質(zhì)量規(guī)格:1000μg/ml林澤蘭內(nèi)酯C
線蟲(chóng)活體染色液(多色藍(lán)法)小平菇(秀珍菇) 5--2-核糖體S6K蛋白激
枯草芽孢桿 (R)-(-)-1-甲氧基-2-蔗糖非酵解型蛋白激1
白地霉 2--5-羥基嘧啶去乙酰化Sirtuin6
4-甲基-D-苯VE
偶發(fā)貪銅 8--4-二氫色原酮脂肪合成
類(lèi)干酪乳桿 對(duì)肉桂硬脂酰ACP脫氫
Mesorhizobium 5-氨基-3-溴苯甲Δ12脂肪脫氫
枯草芽孢桿 5-喹哪啶膜鐵轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白
加德那氏鏈霉 苯并呋喃-2-羧分支變位
鏈霉 (S)-2-氨基-2-環(huán)基乙吡咯啉-5-羧還原
綠梭鏈孢 2,5-二硫脲3-磷甘油脫氫
束紅球 3-溴-[1,2,4]噻唑并[4,3-A]吡啶5-磷核糖激
墨汁鬼傘 4-苯基環(huán)己酮硫代葡萄糖
棗生梅奇酵母 2,4-二羥基-6-甲線粒體膜H+-ATPase
水生黃桿 3-氨基-6-溴吡-2-甲單脫氫抗壞血還原
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