實時熒光定量PCR：
實時熒光定量PCR技術有效地解決了傳統定量只能終點檢測的局限，實現了每一輪循環均檢測一次熒光信號的強度，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個樣品Ct值的計算，根據標準曲線獲得定量結果。因此，實時熒光定量PCR無需內標是建立在兩個基礎之上的：
1）Ct值的重現性PCR循環在到達Ct值所在的循環數時，剛剛進入真正的指數擴增期（對數期），此時微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現性，即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內擴增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值與起始模板的線性關系由于Ct值與起始模板的對數存在線性關系，可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定，因此，實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。
外標準曲線的定量方法相比內標法是一種準確的、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量最準確，重現性*定量方法，已得到的*，廣泛用于基因表達研究、轉基因研究，藥物療效考核、病原體檢測等諸多領域。
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參數規格：
產品名稱：牛流行熱病毒(BEFV)核酸檢測試劑盒
產品規格：50T
產品貨號：FS-P10364
產品分類：熒光PCR法
產品運輸：低溫運輸
儲存條件：-20℃避光保存，避免反復凍融。
運輸：低溫、避光，快遞免費送貨上門。
產品特點：
本產品就是根據保守區設計引物而開發的高靈敏 PCR檢測試劑盒 。
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟 
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）    1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
定量PCR方法：
a、競爭法
選擇由突變克隆產生的含有一個新內切位點的外源競爭性模板。在同一反應管中，待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增（其中一個引物為熒光標記）。擴增后用內切酶消化PCR產物，競爭性模板的產物被酶解為兩個片段，而待測模板不被酶切，可通過電泳或高效液相將兩種產物分開，分別測定熒光強度，根據已知模板推測未知模板的起始拷貝數。
b、內參照法
在不同的PCR反應管中加入已定量的內標和引物，內標用基因工程方法合成。上游引物用熒光標記，下游引物不標記。在模板擴增的同時，內標也被擴增。在PCR產物中，由于內標與靶模板的長度不同，二者的擴增產物可用電泳或高效液相分離開來，分別測定其熒光強度，以內標為對照定量待檢測模板。
c、PCR－ELISA法
利用di高辛或生物素等標記引物，擴增產物被固相板上特異的探針所結合，再加入抗di高辛或生物素酶標抗體－辣根過氧化物酶結合物，最終酶使底物顯色。常規的PCR－ELISA法只是定性實驗，若加入內標，作出標準曲線，也可實現定量檢測目的。
PCR的反應條件：
因擴增片段的大小、反應體積、使用擴增儀器的不同而不同。
◇ 循環次數
根據模板DNA的量以及擴增片段的大小，設定25～30個循環。
如果循環次數太少，擴增量不足；如果循環次數太多，則會出現Smear。
◇ Anneal以及Extension
合適的Anneal溫度通常在45～68℃之間 (預備實驗可2℃間隔進行)。另外，由于在60～68℃間，也有很高的活性, 因此可在此溫度范圍內設定Anneal-Extension溫度, 進行2 Step PCR。Anneal-Extension溫度為68℃ 時，每kbp大體可設定30秒～1分鐘；當溫度設定在68℃以下時, 時間設定可稍長一些。通常，Anneal溫度太高，有時會得不到擴增產物；Anneal溫度太低時，容易發生非特異性反應。另外，Extension時間太短時，會得不到擴增產物或者會有一些短的非特異性產物優成；而Extension時間太長時，會出現Smear。
乳桿菌培養基: CM0006模式菌株: no健康孕婦分泌物提供形式: 凍干物安全等級: 1生長條件: 37℃ -80℃冰箱凍結法

大腸埃希菌研究模式菌株: no病料提供形式: 凍干物安全等級: 2培養基: 335生長條件: 37

釀酒酵母培養基: CM0077以糖蜜為原料發酵酒精。提供形式: 斜面培養物安全等級: 1模式菌株: no生長條件: 28-30℃ 定期移植法

 -418℃冰箱凍結；真空冷凍干燥

沃特曼籃狀菌生長條件: 25-28℃培養基: 0013提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no 液氮超低溫凍結法;真空冷凍干燥法

苜蓿中華根瘤菌與扁蓿豆、紫花苜蓿共生固氮，與扁蓿豆結瘤固氮效果佳，用于苜蓿根瘤菌接種劑模式菌株: no扁蓿豆根瘤提供形式: 斜面培養物安全等級: 1培養基: 0053生長條件: 28-30℃

鏈霉菌生長條件: 28℃培養基: 0012提供形式: 斜面培養物安全等級: 1模式菌株: no 液氮超低溫凍結法；礦物油法；定期移植法

鴨疫里氏桿菌培養基: 0科研教學鴨心血安全等級: 2模式菌株: no生長條件: 37 真空冷凍干燥法;

近綠曲霉釀造醬油。模式菌株: no麩曲提供形式: 凍干物安全等級: 1培養基: CM0085生長條件: 28-30℃

 B.49761var.3噬菌體分型用 1var.3　　　1,4,5　b　1,2模式菌株: no種屬: Salmonella│paratyphi B提供形式: 凍干物安全等級: 2培養基: CM0051生長條件: 37℃

 -419℃冰箱凍結；真空冷凍干燥

大腸埃希氏菌生長條件: 37℃培養基: 2提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no 真空冷凍干燥法

發酵乳桿菌用于分類學研究以及發酵乳制品模式菌株: no發酵牛乳提供形式: 凍干物安全等級: 1培養基: 6生長條件: 37℃

大腸埃希氏菌培養基: CM0385基因克隆實驗菌。提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no生長條件: 37℃ 真空冷凍干燥法

根瘤菌（檸條）與檸條共生固氮模式菌株: no檸條根瘤提供形式: 斜面培養物安全等級: 1培養基: 0053生長條件: 28-30℃

伊氏錐蟲科研及血清定型模式菌株: no水牛血液提供形式: 其他安全等級: 2培養基: 0生長條件: 37

扶化鉀potewwium fluorideAR500g

L9037-25gL-Lysine L-賴安56-87-125g35

0198-25GDextran sulfate 流葡聚糖9011-18-125g

Hoechst 33342染色液10ml

metxyl-α-D-Mannopyranoside100g

乙二醇GlycoGCS2ml

ER1631OliI (AleI)200 units3

D0340-1GVitamin H (D-Biotin) 維生素H (D-生物素)58-85-51g

Crystal violet25g

Zeocin

大鼠氧還原蛋白過氧化物酶2(PRDX2)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

人相撲結合酶UBC9(UBE2I/UBC9/UBCE9)免疫試劑盒 Human SUMO-conjugating enzyme UBC9,UBE2I/UBC9/UBCE9 ELISA kit

γ-谷酰轉肽酶(γ-GT)活性測試盒 可見分光光度法 50管/48樣

RatMetallothionein,MTELISA試劑盒大鼠金屬硫蛋白(MT)ELISA試劑盒規格：96T/48T

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牛流行熱病毒(BEFV)核酸檢測試劑盒賴氨脫羧酶培養基規格：5g用途：生化培養基，賴氨脫羧酶試驗

Cary-Blair氏運送培養基管規格：20支/包用途：用于運送腸道致病菌標本

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