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活細(xì)胞核染料吖啶橙

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更新時間:2022-05-11 15:23:50瀏覽次數(shù):200次

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貨號 FS-X9815
活細(xì)胞核染料吖啶橙正在熱銷的產(chǎn)品:FOXO3A 叉頭蛋白O3A抗體酰酮鉿 97%
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Ph

產(chǎn)品介紹:

橙是一種熒光色素,其檢測激發(fā)濾光片波長488nm。阻斷濾光片波長515nm。它與細(xì)胞中DNA 和RNA 結(jié)合量存在差別,可發(fā)出不同顏色的熒光,與DNA 結(jié)合量少發(fā)綠色熒光,與RNA 結(jié)合量多發(fā)桔黃色或桔紅色熒光。該染料具有膜通透性,能透過細(xì)胞膜,使核DNA 和RNA 染色。

在熒光顯微鏡下觀察,橙可透過正常細(xì)胞膜,使細(xì)胞核呈綠色或黃綠色均勻熒光;而在凋亡細(xì)胞中,因染色質(zhì)固縮或斷裂為大小不等的片斷,形成凋亡小體。橙使其染上致密濃染的黃綠色熒光,或黃綠色碎片顆粒;而壞死細(xì)胞黃熒光減弱甚至消失。橙AO 常與溴化乙啶EB 合用雙染,因EB 只染死細(xì)胞使之產(chǎn)生桔黃色熒光,由此可區(qū)分出正常細(xì)胞、凋亡細(xì)胞及壞死細(xì)胞。

用于細(xì)胞核染色時,推薦的橙工作濃度為0.1%。一般孵育條件是室溫避光15 分鐘。由于不同細(xì)胞對橙的攝取能力不同,該法不一定適用所有細(xì)胞。

儲存:-20℃,避光,有效期12月。

中文名稱:活細(xì)胞核染料吖啶橙

英文名稱:Acridine Orange;AO

產(chǎn)品規(guī)格:25mg

貨號:FS-X9815

實驗報告:

一、分離與培養(yǎng):

1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小;

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;

3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);

二、免疫熒光鑒定:

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;

2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;

5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞,細(xì)胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD)×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

培養(yǎng)操作步驟:

1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;

2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);

3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;

4.將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;

5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

δ樣蛋白1同源物(δLK1)英文名:δLK1 1號染色體開放閱讀框177抗體包裝1g

γ-內(nèi)啡肽(γEP)英文名:γEP 1號染色體開放閱讀框183抗體包裝250mg

γ-谷酰轉(zhuǎn)移1(γGT1)英文名:γGT1 克侖特羅/瘦肉精抗體包裝25g

γ-基丁A受體α2(γABRα2)英文名:γABRα2 6號染色體開放閱讀框151抗體包裝5g

γ-基丁(γABA)英文名:γABA 15號染色體開放閱讀框52抗體包裝100mg

β-血小板球蛋白(βTG)英文名:βTG 2號染色體開放閱讀框89抗體包裝1g

β細(xì)胞(βTC)英文名:βTC BCL10結(jié)合蛋白和激活核轉(zhuǎn)錄因子抗體包裝5g

β-位淀粉樣前體蛋白裂解1(βACE1)英文名:βACE1 凋亡加強(qiáng)結(jié)構(gòu)域蛋白15抗體包裝25g

β-內(nèi)啡肽(βEP)英文名:βEP 慢性淋巴白血病缺失基因6蛋白抗體包裝5g

β-骨膠原交聯(lián)(βCTx)英文名:βCTx 13號染色體開放閱讀框38抗體包裝25g

β2-微球蛋白(β2M)英文名:β2M 14號染色體開放閱讀框140抗體包裝5g

α-生育酚轉(zhuǎn)運蛋白(TTPα)英文名:TTPα 陽離子轉(zhuǎn)運調(diào)節(jié)樣蛋白2抗體包裝1g

α-乳清蛋白(αLA)英文名:αLA 15號染色體開放閱讀框62抗體包裝5g

α-內(nèi)啡肽(αEP)英文名:αEP 15號染色體開放閱讀框41抗體包裝100g

α-骨膠原交聯(lián)(αCTx)英文名:αCTx 環(huán)核陽離子通道蛋白α2抗體包裝25g

蘇云金芽胞桿菌Bacillus│thuringiensis 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR,可用于培養(yǎng)異質(zhì)性胞核核糖核蛋白K試劑盒異牡荊;Isovitexin with

暫無Pararhodobacter│aggregans 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品異質(zhì)性胞核核糖核蛋白I試劑盒右旋龍腦;Borneol

香菇Lentinula│edodes 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR,可用于培養(yǎng)異質(zhì)性胞核核糖核蛋白H試劑盒油;cis-9-Octadecenoi
活細(xì)胞核染料吖啶橙氧化節(jié)桿 1-溴-4-正十二烷基苯C1q腫瘤壞死因子相關(guān)蛋白5

猴頭 醋烏利司他蛋白激M2

馬克斯克魯維酵母 5-溴-2-芐氧基-6-磷酯Cε鏈

出芽短梗霉 磷三異丁酯狂犬病抗體

聚生殼 2-氨基-3,5-二氟膜輔蛋白

球孢白僵 4-芐基嗎啉-2-甲α-乳白蛋白

釀酒酵母 2-(甲氧基)苯抗骨骼肌抗體

根瘤 3-甲酰氨基-3-苯基Ⅱ型膠原代謝產(chǎn)物C2C

松口蘑 6,6'-二溴-N,N'-(2-辛基十二烷基)-異靛藍(lán)小而密低密度脂蛋白膽固

斑玉蕈 2-溴-3-氨基-6-snap-tag蛋白

醬油曲霉 2-溴-3-氨基-4-血小板衍化生長因子A

釀酒酵母 3-氨基-4-溴-2-CXC趨化因子受體5

蝦苗殺蝦微桿 4-乙氧基-2,3-二氟苯甲單純皰疹病1IgG抗體

果生鏈核盤 Dowex? 50WX2-100離子交換樹脂單純皰疹病1IgM抗體

根瘤 4-溴甲基-2--頻那酯水痘-帶狀皰疹病IgG抗體

 


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