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| 貨號 | FS-X9875 |
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產(chǎn)品介紹:
熒光染料PKH67 是一種可對活細(xì)胞進(jìn)行熒光標(biāo)記的新型染料，可以標(biāo)記活體細(xì)胞，通過與膜結(jié)構(gòu)的脂質(zhì)分子結(jié)合而標(biāo)記細(xì)胞。 PKH67對細(xì)胞毒性較小，熒光背景低，脂溶性高，能夠輕易穿透細(xì)胞膜，有著強(qiáng)而穩(wěn)定的綠色熒光。經(jīng)PKH67標(biāo)記的細(xì)胞可用于體外和體內(nèi)增殖研究，且具有不會使鄰近細(xì)胞染色的功能。 在細(xì)胞分裂增殖過程中，PKH67 的熒光強(qiáng)度會隨著細(xì)胞的分裂而逐級遞減，標(biāo)記熒光可平均分配至兩個子代細(xì)胞中，因此其熒光強(qiáng)度是親代細(xì)胞的一半，根據(jù)這一特性，它可被用于檢測細(xì)胞增殖，細(xì)胞周期的估算及細(xì)胞分裂等方面。PKH67標(biāo)記細(xì)胞的熒光非常均一，并且分裂后的子代細(xì)胞的熒光分配也更均一。在細(xì)胞分裂增殖過程中，PKH67標(biāo)記熒光可平均分配至兩個子代細(xì)胞中，熒光強(qiáng)度變?yōu)橛H代細(xì)胞的一半，通過流式細(xì)胞儀根據(jù)熒光強(qiáng)度的不同，可檢測出未分裂細(xì)胞，分裂一次(1/2 的熒光強(qiáng)度)，二次(1/4 的熒光強(qiáng)度)，三次(1/8 的熒光強(qiáng)度)，以及更多分裂次數(shù)的細(xì)胞。PKH67 可檢測分裂次數(shù)多達(dá)六次甚至更多。 除了用于細(xì)胞增殖檢測，PKH67 還可以用于細(xì)胞的體外盒體內(nèi)示蹤，標(biāo)記后熒光在胞內(nèi)表達(dá)穩(wěn)定，陽性標(biāo)記率達(dá)98%以上，標(biāo)記細(xì)胞形態(tài)良好，能有效地觀察細(xì)胞在體外的誘導(dǎo)分化情況；或?qū)?biāo)記的細(xì)胞注入體內(nèi)，可以有效的顯示移植細(xì)胞在活體組織中的遷移及分化。 PKH67標(biāo)記的細(xì)胞用于體內(nèi)觀察可以長達(dá)數(shù)周之久，它常被用來做活體細(xì)胞檢測實驗和用熒光電鏡觀察細(xì)胞長期活動的實驗。PKH67 毒性較小，不影響細(xì)胞的增殖能力。此方法操作簡單，且不用放射性同位素，不存在安全隱患。可以更快速，更準(zhǔn)確和更安全地得到想要的實驗數(shù)據(jù)。 PKH67標(biāo)記細(xì)胞后通常用流式細(xì)胞儀進(jìn)行細(xì)胞增殖檢測。 PKH67標(biāo)記細(xì)胞呈綠色熒光，熒光波長：λex=490 nm,λem=502 nm。 儲存條件：-20℃避光保存。 |
中文名稱：細(xì)胞膜染色試劑盒(PKH67)
英文名稱：
產(chǎn)品規(guī)格：500T
貨號：FS-X9875
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)： 1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小； 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置； 3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化； 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)； 5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)； | 二、免疫熒光鑒定： 1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min； 2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min； 3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min； 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜； 5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h； 6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞，細(xì)胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟：
1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；
4．將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；
5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
印度芽孢桿菌軟骨蛋白聚糖抗體Human LRMP 豬磷激,γ1(肌肉)(PHKG1)免疫試劑盒
釀酒酵母5-基乙酰合1抗體Human LRDD 豬磷化乙酰羧化(pACCase)免疫試劑盒
斑玉蕈p53凋亡激蛋白1抗體Human LRPAP1 豬磷化腺活化蛋白激(pAMPK)免疫試劑盒
木蹄層孔菌P53凋亡激蛋白2抗體Human LRR 1(Leucine-rich repeat protein 1) 豬磷化外信號調(diào)節(jié)激(pERK)免疫試劑盒
枯草芽孢桿菌枯草亞種激活受體2B抗體Human LRRC1 豬磷甘油酯激2(PGK2)免疫試劑盒
佩特曲霉AIMP2抗體Human LPIN2 豬藍(lán)耳病(PRRSV)抗體(IgG)免疫試劑盒
膠孢乙酰抗體Human LPHN3 豬賴酰氧化免疫試劑盒
美麗短芽孢桿菌5-基乙酰合1抗體Human LPPR2 豬口蹄疫抗體免疫試劑盒
奇異球菌防御α1/3抗體Human LPP 豬口蹄疫抗體(IgM)免疫試劑盒
根瘤菌ABC膜轉(zhuǎn)運蛋白抗體Human LRCH1 豬口蹄疫抗體(IgG)免疫試劑盒
紅曲紅曲植物延長蛋白（擬南芥）Human LPXN 豬可溶性血管粘附分子1(sVCAM-1)免疫試劑盒
短桿狀馬賽菌A-Raf抗體Human LRAT 豬可溶性血管內(nèi)皮生長因子受體2(VEGFR-2/sFLK-1)免疫試劑盒
傘枝犁頭霉磷化A-Raf抗體Human LPIN2 豬可溶性間粘附分子1(sICAM-1)免疫試劑盒
摩洛哥芽孢桿菌紅腺脫3抗體Human LPP 豬可溶性P選擇(sP-Selectin)免疫試劑盒
囊孔附毛菌雄激結(jié)合蛋白抗體Human LMNB2 豬抗中性粒彈性蛋白抗體(ANEA)免疫試劑盒
膠孢肝再生增強(qiáng)因子抗體Human LPPR2 豬巨噬炎性蛋白1α(MIP-1α/CCL3)免疫試劑盒
小單孢菌屬菌種Micromonospora│sp. 質(zhì)量規(guī)格：>99%，BC補(bǔ)體片段3d試劑盒紫莖女貞D
海洋紅嗜熱鹽菌Rhodothermus│marinus 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR補(bǔ)體片段3c試劑盒紫莖女貞C
泡盛曲霉Aspergillus│awamori 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR補(bǔ)體片段3b受體試劑盒紫莖女貞B(tài)
細(xì)胞膜染色試劑盒(PKH67)鏈球?qū)?/span> γ-十二內(nèi)酯普列克底物蛋白同源物樣域家族A成員2
微白螺孢 Nα-CBZ-Nω-硝基-L-精納豆激
細(xì)鏈格孢 AZD1981酮羧化
黑曲霉 4-溴-2-硝基芐酮激
煙曲霉 2-氨甲基α-亞麻
乳桿屬 2-(4-基)-2-景天庚酮糖二磷
側(cè)耳 4-溴-1-萘VI型膠原蛋白
戴爾根霉 (1R,2R)-2-Amino-1-phenylpropyldiphenylphosphine, mV型膠原蛋白
第三梭 2-戊基吡啶角膜蛋白多糖
棒曲霉 3-四酮肉
毛木耳 3-乙氧基苯甲甘
銅綠假單胞 Linifanib (ABT-869)中性粒抑制因子
大腸埃希氏桿 2-溴-4-氟芐CD41分子
路德酵母 2-溴-4-甲基-1,3-噻唑-5-甲乙酯CD61分子
藍(lán)色犁頭霉 Apoptosis Activator 2激肽釋放
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