操作步驟:

(1) 細胞系培養(yǎng)：取6cm細胞皿，向每孔中加入2mL含1~2×105個細胞培養(yǎng)液，37℃ CO2培養(yǎng)密度至40%~60%，密度過大，轉(zhuǎn)染后不利篩選細胞。

(2) 轉(zhuǎn)染液制備：在EP管中制備以下兩液(為轉(zhuǎn)染每一個孔細胞所用的量)

A液：用不含血清培養(yǎng)基稀釋1ug 質(zhì)粒DNA。

B液：用不含血清培養(yǎng)基稀釋2ul脂質(zhì)體。

分別將A液與B液輕彈混勻，靜置5分鐘。

(3) 吸取B液加入至A液中，輕彈混勻。室溫中置10-15分鐘。

(4) 轉(zhuǎn)染準(zhǔn)備：用1mL不含血清培養(yǎng)液漂洗兩次，再加入4mL不含血清培養(yǎng)液。

(5) 轉(zhuǎn)染：把A/B復(fù)合物緩緩加入培養(yǎng)液中，搖勻，37℃溫箱置6~24小時，吸除無血清轉(zhuǎn)染液，換入正常培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。

(6) 瞬時轉(zhuǎn)染后，可在48h-72h細胞長滿之后，提取細胞蛋白或者RNA，驗證敲減/過表達效率。

商品介紹：

細胞凍存注意事項：
(1)  細胞的收獲
用來凍存的細胞一般選擇在細胞約鋪滿 90% 的時候，這時細胞生長狀態(tài)好，細胞數(shù)量也多，并且在收獲細胞前 24 小時換一次培養(yǎng)液。收獲用來凍存的細胞開始時方法和平時一樣，用 100xg 離心 5 分鐘收集細胞再重懸，活細胞記數(shù)。稀釋或濃縮到細胞保存的最終細胞濃度的二倍(一般是 400-1000 萬 細胞 /ml )，加入已經(jīng)配好的等體積的培養(yǎng)液保護劑混合溶液中輕輕混勻，分裝到凍存管，冷凍保存。
(2)  保護劑的使用
細胞凍存中， 一般使用DMSO 作為保護劑。在細胞凍存中， DMSO 使用的最終濃度一般是 5-15% ，某種具體細胞的凍存液中的DMSO濃度可以從ATCC查到。對特別敏感的細胞特別是雜交瘤細胞在凍存時使用 95% 血清和 5%DMSO 可能會好些。保護劑在使用時先用培養(yǎng)液或血清配成最終濃度的2倍，再與等體積的懸浮細胞的培養(yǎng)液混合。
(3)  細胞凍存的速率
細胞的冷凍速率最適控制在讓細胞有足夠的時間脫水而又不被過度脫水導(dǎo)致細胞損害。對大多數(shù)細胞來說，每分鐘降 1 至 3 ℃是合適的。通常的操作是把細胞先在-20℃1-2個小時，再放入 -80℃冰箱過夜(如果沒有-80℃冰箱，可以用干冰替代)，再轉(zhuǎn)入液氮罐或低于 -130℃的冰箱長期保存。
(4)  儲存環(huán)境
細胞長期保存溫度是 -130 ℃或更低。液氮罐中氣態(tài)層溫度在 -140℃至 -180℃之間，細胞可保存在氣態(tài)層或浸入液氮中，如果可能最好保存在氣態(tài)層，因為這樣可避免由于有液氮進入凍存管而在拿出細胞時引起爆炸(但是這樣液氮罐內(nèi)只能存儲少量液氮，需要經(jīng)常添加)。細胞也可以在-80℃冰箱保存幾個月左右的時間。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠粒細胞趨化蛋白2(GCP2)ELISA試劑盒 ，英文名： GCP2 ELISA Kit

Monkey leukoiene C4 (LTC4) ELISA Kit白三烯C4(LTC4)ELISA試劑盒

RatCyclosporineA,CsAELISAKit 大鼠A(CsA)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforGALELISAKit大鼠甘肽/甘素規(guī)格：48T/96T

細胞胱(cystine)含量高效液相色譜法定量檢測試劑盒20次

ratProstaglandinF,PG

小鼠0酸肌醇-3-激酶2α肽(PI3K2α)ELISA試劑盒 ，英文名： PI3K2α ELISA Kit

人谷脫羧酶(GAD)ELISA檢測試劑盒Humanglamicaciddecarboxylase,GADELISAKit 96T/48T

大鼠牙本質(zhì)0蛋白(DPP)免疫試劑盒 Rat dein phosphoproteins,DPP ELISA kit

英文名稱RatHLA-1ELISAKit大鼠組織相容性抗原(HLA-1)規(guī)格：96T/48T

鈣調(diào)蛋白結(jié)合檢測試劑盒篩選5次

ELISAKitLPL

人組織蛋白酶K(cath-K)ELISA 試劑盒

Human hepatitis B virus X aigen (HBxAg) ELISA Kit 人乙型肝炎病毒X抗原(HBxAg)ELISA試劑盒

Humanai-hepatitisBviruscoreaibody,HBcAbELISAKit 人抗乙型肝炎病毒核心抗體(HBcAb)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

Humanhemeoxygenase2,HO-2ELISA試劑盒人血紅素氧合酶2(HO-2)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T 

HCC 38人乳腺導(dǎo)管癌細胞豚鼠主要組織相容性復(fù)合體(MHC/GPLA)ELISA試劑盒 ，英文名： MHC/GPLA ELISA Kit

Human protein kinase B (PKB) ELISA Kit 人蛋白激酶B(PKB)ELISA試劑盒

Monkeytumornecrosisfactor-relatedapoptosis-inducingligand3,AIL-R3ELISAKit壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體3(AIL-R3)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforBMP-6(HumanBon

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