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實時熒光定量PCR:
實時熒光定量PCR技術有效地解決了傳統定量只能終點檢測的局限,實現了每一輪循環均檢測一次熒光信號的強度,并記錄在電腦軟件之中,通過對每個樣品Ct值的計算,根據標準曲線獲得定量結果。因此,實時熒光定量PCR無需內標是建立在兩個基礎之上的:
1)Ct值的重現性PCR循環在到達Ct值所在的循環數時,剛剛進入真正的指數擴增期(對數期),此時微小誤差尚未放大,因此Ct值的重現性,即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內擴增,得到的Ct值是恒定的。
2)Ct值與起始模板的線性關系由于Ct值與起始模板的對數存在線性關系,可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定,因此,實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。
外標準曲線的定量方法相比內標法是一種準確的、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量最準確,重現性*定量方法,已得到的*,廣泛用于基因表達研究、轉基因研究,藥物療效考核、病原體檢測等諸多領域。?
參數規格:
產品名稱:白色念珠菌(CAN)核酸檢測試劑盒
產品規格:50T
產品貨號:FS-P10426
產品分類:熒光PCR法
產品運輸:低溫運輸
儲存條件:-20℃避光保存,避免反復凍融。
運輸:低溫、避光,快遞免費送貨上門。
產品特點:
本產品就是根據保守區設計引物而開發的高靈敏 PCR檢測試劑盒 。
實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
定量PCR方法:
a、競爭法
選擇由突變克隆產生的含有一個新內切位點的外源競爭性模板。在同一反應管中,待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增(其中一個引物為熒光標記)。擴增后用內切酶消化PCR產物,競爭性模板的產物被酶解為兩個片段,而待測模板不被酶切,可通過電泳或高效液相將兩種產物分開,分別測定熒光強度,根據已知模板推測未知模板的起始拷貝數。
b、內參照法
在不同的PCR反應管中加入已定量的內標和引物,內標用基因工程方法合成。上游引物用熒光標記,下游引物不標記。在模板擴增的同時,內標也被擴增。在PCR產物中,由于內標與靶模板的長度不同,二者的擴增產物可用電泳或高效液相分離開來,分別測定其熒光強度,以內標為對照定量待檢測模板。
c、PCR-ELISA法
利用di高辛或生物素等標記引物,擴增產物被固相板上特異的探針所結合,再加入抗di高辛或生物素酶標抗體-辣根過氧化物酶結合物,最終酶使底物顯色。常規的PCR-ELISA法只是定性實驗,若加入內標,作出標準曲線,也可實現定量檢測目的。
PCR的反應條件:
因擴增片段的大小、反應體積、使用擴增儀器的不同而不同。
◇ 循環次數
根據模板DNA的量以及擴增片段的大小,設定25~30個循環。
如果循環次數太少,擴增量不足;如果循環次數太多,則會出現Smear。
◇ Anneal以及Extension
合適的Anneal溫度通常在45~68℃之間 (預備實驗可2℃間隔進行)。另外,由于在60~68℃間,也有很高的活性, 因此可在此溫度范圍內設定Anneal-Extension溫度, 進行2 Step PCR。Anneal-Extension溫度為68℃ 時,每kbp大體可設定30秒~1分鐘;當溫度設定在68℃以下時, 時間設定可稍長一些。通常,Anneal溫度太高,有時會得不到擴增產物;Anneal溫度太低時,容易發生非特異性反應。另外,Extension時間太短時,會得不到擴增產物或者會有一些短的非特異性產物優成;而Extension時間太長時,會出現Smear。
茯苓食用模式菌株: no朽木提供形式: 凍干物安全等級: 1培養基: 14生長條件: 25℃
-564℃冰箱凍結;真空冷凍干燥
枯草芽胞桿菌培養基: 33有機污染物降解菌/石油,柴油等烷烴類物質降解菌 產酶微生物/淀粉酶、蛋白酶、脂酶(三丁甘油酯)水樣/污油處理池污水提供形式: 凍干物模式菌株: no生長條件: 28℃ 液氮超低溫凍結法;-80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法
楚氏喜鹽芽胞桿菌1.生物降解;2.生物催化;3.生物活性物質篩選; 4.海洋微生物生態學研究。模式菌株: no沉積物/表層沉積物提供形式: 凍干物安全等級: 1培養基: 821生長條件: 25℃
擬盤多毛孢培養基: 0014模式菌株: no植物提供形式: 凍干物安全等級: 1生長條件: 18-26℃ 液氮超低溫凍結法;真空冷凍干燥法
發酵乳桿菌用于分類學研究以及發酵乳制品模式菌株: no發酵牛乳提供形式: 凍干物安全等級: 1培養基: 6生長條件: 37℃
HBUM172298模式菌株: no安全等級: 1種屬: Streptomyces│sp.土壤提供形式: 凍干物培養基: 0149生長條件: 28℃
釀酒酵母培養基: 0013活性干酵母提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no生長條件: 25-28℃ 液氮超低溫凍結法;真空冷凍干燥法
-565℃冰箱凍結;真空冷凍干燥
米曲霉培養基: CM0085釀酒。提供形式: 斜面培養物安全等級: 1模式菌株: no生長條件: 28-30℃ 定期移植法;其他
炭疽芽胞桿菌科研及血清定型模式菌株: no病料提供形式: 凍干物安全等級: 1培養基: 335生長條件: 37
蛇孢霉屬培養基: 14模式菌株: no檸條根系土壤提供形式: 斜面培養物安全等級: 1生長條件: 18-25 定期移植法
灰藤黃鏈霉菌生長條件: 28℃培養基: 0020提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no 液氮超低溫凍結法;真空冷凍干燥法
副氧化微桿菌培養基: 820模式菌株: no土壤提供形式: 凍干物安全等級: 1生長條件: 30℃ 真空冷凍干燥法
巨型艾美爾球蟲可供藥物試驗模式菌株: no病雞糞便經單一卵囊分離提供形式: 其他安全等級: 2培養基: 0生長條件: 30
-566℃冰箱凍結;真空冷凍干燥
流鋁Aluminum sulfateAR500g
MD001DNA凝膠快速回收試劑盒vdfdfd400
0335-100GSucrose 蔗糖57-50-1100g
四甲基以兒按10ml
Neutral Red25g
鐵粉Iron powderSP10g
粉100-200目(*)megnewium powder99%500g
鎵Gallium5N10g
鄰本二價二正戊酯Dipentyl phthalate色固100ml
硒粉Selenium powder99.95%25g
大鼠胰高糖素肽(Glp-1)ELISA試劑盒 組裝/原裝
人鋅轉運蛋白6(Z6)免疫試劑盒 Human zinc anspoer 6,Z6 ELISA Kit
蘋果酶(ME)測試盒 紫外分光光度法 50管/48樣
RatmajorhistocompatibilitycomplexⅠ,MHCⅠ/AgBⅠ/H-1ⅠELISA試劑盒大鼠主要組織相容性復合體Ⅰ類(MHCⅠ/AgBⅠ/H-1Ⅰ)ELISA試劑盒規格:96T/48T
HumanHeatShockProtein90,HSP-90ELISA試劑盒人熱休克蛋白90(HSP-90)ELISA試劑盒規格:96T/48T
HumanLeukoieneB4,LT-B4ELISAKit人白三烯B4(LTB4)ELISA試劑盒規格:96T/48T
白色念珠菌(CAN)核酸檢測試劑盒石吊蘭甲素152743-19-6中文別名:5,7-二羥基-4′,6,8-甲氧基黃
英文名:Lysionotin
登錄號:152743-19-6
分子式:C18H16O7
分子量:344
分子結構:
外觀:黃色晶體
規格:20 mg/支
純度:≥ 98%
用途:用于含量測定/鑒定/藥理實驗等。
提取來源:唇形科植物羅勒(Ocimum basilicumL.)
溶解性:溶于5% Na2CO3,KOH或NaOH溶液.略溶于,微溶于、乙醇及,極微溶于,不溶于水。
熔點:195~196℃
藥理藥效:淋巴結核、肺結核、骨結核的輔助治療,也可用于支氣管炎。
貯存條件: 4℃冷藏、密封、避光
有效期: 2年
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