細胞培養操作規程：

一．培養基及培養凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優質胎牛血清，10%。

2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

產品屬于：

產品名稱：胃成纖維細胞    

產品規格：5×105

貨號：FS-01X9796

產品類型：原代細胞

單位：T25/瓶

提供細胞鑒定：提供免疫熒光鑒定報告

保存培養溫度（℃）：37

運輸溫度（℃）：常溫

細胞培養的優點：

注意事項：

小鼠趨化因子(fractalkine/CX3CL1) ELISA試劑盒英文名稱：Mouse fractalkine/CX3CL1 ELISA Kit 規格:96T/48T

小鼠粒細胞集落刺激因子(G-CSF)ELISA試劑盒英文名稱：Mouse Granulocyte Colony Stimulating Factor,G-CSF ELISA Kit 規格:96T/48T

小鼠胰島樣生長因子1(IGF-1)ELISA試劑盒英文名稱：Mouse Insulin-like growth factor 1,IGF-1 ELISA Kit 規格:96T/48T

小鼠白介10(IL-10)ELISA試劑盒 英文名稱：Mouse interleukin 10,IL-10 ELISA Kit 規格:96T/48T

小鼠白介11(IL-11)ELISA試劑盒英文名稱：Mouse Interleukin 11,IL-11 ELISA Kit 規格:96T/48T

小鼠白介15(IL-15)ELISA試劑盒英文名稱：Mouse Interleukin 15,IL-15 ELISA Kit規格:96T/48T

小鼠17羥皮質類固(17-OHCS)ELISA試劑盒英文名稱：Mouse 17-Hydroxycorticosteroids,17-OHCS ELISA Kit 規格:96T/48T

小鼠白介1α(IL-1α)ELISA試劑盒英文名稱：Mouse Interleukin 1α,IL-1α ELISA Kit 規格:96T/48T

小鼠白介2(IL-2)ELISA試劑盒英文名稱：Mouse Interleukin 2,IL-2 ELISA Kit 規格:96T/48T

小鼠白介6(IL-6)ELISA試劑盒英文名稱：Mouse Interleukin 6,IL-6 ELISA Kit 規格:96T/48T

小鼠白介9(IL-9)ELISA試劑盒英文名稱：Mouse Interleukin 9,IL-9 ELISA Kit 規格:96T/48T

小鼠苗條受體(LR/Ob-R)ELISA試劑盒英文名稱：Mouse Leptin receptor,LR/Ob-R ELISA Kit 規格:96T/48T

小鼠瘦(LEP)ELISA試劑盒英文名稱：Mouse Leptin,LEP ELISA Kit 規格:96T/48T

小鼠白血病抑制因子(LIF)ELISA試劑盒英文名稱：Mouse Leukemia inhibitory factor,LIF ELISA Kit 規格:96T/48T

小鼠巨噬細胞炎性蛋白1β(MIP-1β/CCL4)ELISA試劑盒英文名稱：Mouse Macrophage Inflammatory Protein 1β,MIP-1β ELISA Kit 規格:96T/48T

小鼠巨噬細胞炎性蛋白3α(MIP-3α/CCL20)ELISA試劑盒英文名稱：Mouse Macrophage Inflammatory Protein 3α,MIP-3α ELISA Kit 規格:96T/48T

小鼠基質金屬蛋白2/明膠A(MMP-2/Gelatinase A)ELISA試劑盒英文名稱：Mouse matrix metalloproteinase 2/Gelatinase A,MMP-2 ELISA Kit規格:96T/48T

小鼠煙酰腺二核磷(NADPH)ELISA試劑盒英文名稱：Mouse nicotinamide adenine dinucleotide phosphate,NADPH ELISA Kit 規格:96T/48T
胃成纖維細胞RAG1/RNF74  環指蛋白74抗體（重組激活基因1）規格: 0.2ml

POMC  阿黑皮原抗體規格: 0.1ml

FBXL11  FBXL11蛋白抗體規格: 0.2ml

ASAP1/DDEF1  發育分化增強因子1抗體規格: 0.1ml

phospho-ER-beta(ser87)  磷化雌受體β抗體規格: 0.1ml

phospho-ASAP1/DDEF1(Tyr782)  磷化發育分化增強因子1抗體規格: 0.1ml

RAG2  重組激活基因2蛋白抗體規格: 0.2ml

ASMTY/HIOMT  松果體N甲基乙酰羥色抗體規格: 0.2ml
實驗報告：

一、分離與培養：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；

5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。