實時熒光定量PCR：
實時熒光定量PCR技術有效地解決了傳統定量只能終點檢測的局限，實現了每一輪循環均檢測一次熒光信號的強度，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個樣品Ct值的計算，根據標準曲線獲得定量結果。因此，實時熒光定量PCR無需內標是建立在兩個基礎之上的：
1）Ct值的重現性PCR循環在到達Ct值所在的循環數時，剛剛進入真正的指數擴增期（對數期），此時微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現性，即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內擴增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值與起始模板的線性關系由于Ct值與起始模板的對數存在線性關系，可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定，因此，實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。
外標準曲線的定量方法相比內標法是一種準確的、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量最準確，重現性*定量方法，已得到的*，廣泛用于基因表達研究、轉基因研究，藥物療效考核、病原體檢測等諸多領域。
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參數規格：
產品名稱：轉基因玉米品系Bt11核酸檢測試劑盒
產品規格：48T   0.1PCR管
產品貨號：FS-P10742
產品分類：熒光探針法
產品運輸：低溫運輸
儲存條件：-20℃避光保存，避免反復凍融。
運輸：低溫、避光，快遞免費送貨上門。
產品特點：
本產品就是根據保守區設計引物而開發的高靈敏 PCR檢測試劑盒 。
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟 
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）    1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
定量PCR方法：
a、競爭法
選擇由突變克隆產生的含有一個新內切位點的外源競爭性模板。在同一反應管中，待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增（其中一個引物為熒光標記）。擴增后用內切酶消化PCR產物，競爭性模板的產物被酶解為兩個片段，而待測模板不被酶切，可通過電泳或高效液相將兩種產物分開，分別測定熒光強度，根據已知模板推測未知模板的起始拷貝數。
b、內參照法
在不同的PCR反應管中加入已定量的內標和引物，內標用基因工程方法合成。上游引物用熒光標記，下游引物不標記。在模板擴增的同時，內標也被擴增。在PCR產物中，由于內標與靶模板的長度不同，二者的擴增產物可用電泳或高效液相分離開來，分別測定其熒光強度，以內標為對照定量待檢測模板。
c、PCR－ELISA法
利用di高辛或生物素等標記引物，擴增產物被固相板上特異的探針所結合，再加入抗di高辛或生物素酶標抗體－辣根過氧化物酶結合物，最終酶使底物顯色。常規的PCR－ELISA法只是定性實驗，若加入內標，作出標準曲線，也可實現定量檢測目的。
PCR的反應條件：
因擴增片段的大小、反應體積、使用擴增儀器的不同而不同。
◇ 循環次數
根據模板DNA的量以及擴增片段的大小，設定25～30個循環。
如果循環次數太少，擴增量不足；如果循環次數太多，則會出現Smear。
◇ Anneal以及Extension
合適的Anneal溫度通常在45～68℃之間 (預備實驗可2℃間隔進行)。另外，由于在60～68℃間，也有很高的活性, 因此可在此溫度范圍內設定Anneal-Extension溫度, 進行2 Step PCR。Anneal-Extension溫度為68℃ 時，每kbp大體可設定30秒～1分鐘；當溫度設定在68℃以下時, 時間設定可稍長一些。通常，Anneal溫度太高，有時會得不到擴增產物；Anneal溫度太低時，容易發生非特異性反應。另外，Extension時間太短時，會得不到擴增產物或者會有一些短的非特異性產物優成；而Extension時間太長時，會出現Smear。
漆斑菌屬培養基: CM0018活性物質；退行性疾病提供形式: 斜面培養物安全等級: 1模式菌株: no生長條件: 28C -80℃冰箱凍結

黑曲霉培養基: CM0013產檸檬。提供形式: 斜面培養物安全等級: 1模式菌株: no生長條件: 35℃ 礦物油法

多殺性巴氏桿菌科研及血清定型模式菌株: no病料提供形式: 凍干物安全等級: 2培養基: 56生長條件: 37

 -1538℃冰箱凍結；真空冷凍干燥

類芽孢桿菌培養基: 0002模式菌株: no污水提供形式: 凍干物安全等級: 1生長條件: 30℃ 液氮超低溫凍結法;真空冷凍干燥法

 KCTC22805T=CCUG58403T模式菌株模式菌株: yes種屬: Roseivivax│marinus水樣/海水提供形式: 凍干物培養基: 471生長條件: 28℃

多主棒孢生長條件: 25℃培養基: 0014提供形式: 斜面培養物安全等級: 1模式菌株: no

煙束曲霉培養基: 0015模式菌株: no土壤提供形式: 凍干物安全等級: 1生長條件: 25-28℃ 液氮超低溫凍結法;真空冷凍干燥法

奇異變形桿菌生長條件: 36℃模式菌株: no尿提供形式: 凍干物安全等級: 2 -80℃冰箱凍結法

黑曲霉培養基: 14發酵，教學提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no生長條件: 28℃ 真空冷凍干燥法；定期移植法

 -1539℃冰箱凍結；真空冷凍干燥

土曲霉培養基: CM0076衣康。提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no生長條件: 28-30℃ 真空冷凍干燥法；定期移植法

鏈格孢培養基: 0014模式菌株: no植物提供形式: 凍干物安全等級: 1生長條件: 25℃ 液氮超低溫凍結法;真空冷凍干燥法

谷氨棒桿菌Ⅲ型培養基: CM0050谷氨菌。提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no生長條件: 30℃ 真空冷凍干燥法

紅城紅球菌大洋細菌模式菌株: no沉積物/深海沉積物提供形式: 凍干物安全等級: 1培養基: 471生長條件: 4℃

蘇云金芽孢桿菌生長條件: 30℃培養基: 2提供形式: 斜面培養物安全等級: 1模式菌株: no 真空冷凍干燥法

馬錢苷GRB2/ASH peptide  生長因子受體結合蛋白2抗原TTC3/RNF105  環指蛋白105抗體

仙鶴草酚BGZMB/CCPI(Granzyme B)  顆粒酶B抗原TTC23  原癌基因8抗體

升麻-3-O-β-D-吡喃木糖苷UTS2R/GPR14(Urotensin II receptor：G Protein Coupled Receptor 14)  G蛋白偶聯受體14抗原TTBK1/BDTK  腦源性tau蛋白激酶抗體

牡荊素鼠李糖苷GPR30(G Protein Coupled Receptor 30)  G蛋白偶聯受體30抗原TSSK6/CT72  特異絲氨/蘇氨激酶6抗體

牡荊素GnRHR peptide  促性腺激素釋放激素受體抗原TSSC3  腫瘤抑制轉移候選基因3抗體

R型人參皂苷Rg3KiSS-1R/GPR54/GPCR54(KiSS-1 receptor/G-Protein Coupled Receptor 54)  G蛋白偶聯受體54抗原TSPYL5  特異性Y蛋白樣5抗體

R型原人參三GRK2/BARK1 (G-protein coupled receptor kinase 2)  G蛋白偶合受體激酶2抗原TSPY1  特異定蛋白質編碼Y1抗體

雪膽素甲GRM2/GLUR2 (Glutamate Receptor Metabotropic 2)  促代謝型谷氨受體2抗原TSPAN9/NET-5  四分子交聯體9/四旋蛋白抗體

雪膽素乙GRP78(glucose regulated protein 78)  葡萄糖調節蛋白78抗原（熱休克蛋白70蛋白5）TSPAN6/TALLA-1/CD231  T急性淋巴母白血病相關抗原抗體

蔓荊子黃素GSK-3 Alpha (Glycogen Synthase Kinase-3 alpha)  葡萄糖合成激酶-3α抗原(多肽抗原)TSPAN6  四分子交聯體6抗體（四旋蛋白）
轉基因玉米品系Bt11核酸檢測試劑盒Nicotinamide　煙酰胺/尼克酰胺/維生素B3　質量規格：>98%

Nicotinamide　維生素B3(標準品)　質量規格：>98%

Cyproteroneacetate　醋環丙孕,醋環丙地孕　質量規格：>98%

Cyproteroneacetate　醋環丙孕(標準品)　質量規格：>98%

Megestrolbase　甲地孕　質量規格：>98%

Megestrolbase　甲地孕(標準品)　質量規格：>98%

Estradienedione-3-keta　3-縮　質量規格：>98%

Sorafenibbase　索拉非尼　質量規格：>98%

Histaminephosphate　二磷組胺；磷組胺　質量規格：>98%

Chloroquinediphosphate　磷喹,喹二磷鹽　質量規格：>98%

(-)-Hyoscyamine　(-)-莨菪,L-天仙子胺，L-天仙子　質量規格：>98%

(-)-Hyoscyamine　(-)-莨菪,L-天仙子胺，澳洲茄(標準品)　質量規格：>98%

DextranD70　葡聚糖D70/右旋糖苷　質量規格：>98%

DextranD40　右旋糖苷/葡聚糖D40　質量規格：>98%

DextranD20　葡聚糖D20/右旋糖苷　質量規格：>98%