細胞培養操作規程：

一．培養基及培養凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優質胎牛血清，10%。

2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

產品屬于：

產品名稱：白介素-3    

英文名稱：IL-3(C-6his Mouse )

貨號：FS-02X0053

規格：10ug   

細胞培養的優點：

注意事項：

 Toll Like Receptor 1 (TLR1)Toll樣受體1(TLR1)檢測試劑盒(聯免疫吸附試驗法)規格：48T/96T

 Toll Like Receptor 3 (TLR3)Toll樣受體3(TLR3)檢測試劑盒(聯免疫吸附試驗法)規格：48T/96T

 Bone Morphogenetic Protein 1 (BMP1)骨形成蛋白1(BMP1)檢測試劑盒(聯免疫吸附試驗法)規格：48T/96T

 Toll Like Receptor 5 (TLR5)Toll樣受體5(TLR5)檢測試劑盒(聯免疫吸附試驗法)規格：48T/96T

 Toll Like Receptor 8 (TLR8)Toll樣受體8(TLR8)檢測試劑盒(聯免疫吸附試驗法)規格：48T/96T

 Toll Like Receptor 10 (TLR10)Toll樣受體10(TLR10)檢測試劑盒(聯免疫吸附試驗法)規格：48T/96T

 Arachidonate-12-Lipoxygenase (ALOX12)花生四烯-12-脂加氧(ALOX12)檢測試劑盒(聯免疫吸附試驗法)規格：48T/96T

 Arachidonate-12-Lipoxygenase (ALOX12)花生四烯-12-脂加氧(ALOX12)檢測試劑盒(聯免疫吸附試驗法)規格：48T/96T

 Arachidonate-12-Lipoxygenase (ALOX12)花生四烯-12-脂加氧(ALOX12)檢測試劑盒(聯免疫吸附試驗法)規格：48T/96T

 Arrestin Beta 1 (ARRb1)抑制蛋白β1(ARRβ1)檢測試劑盒(聯免疫吸附試驗法)規格：48T/96T

 Arrestin Beta 2 (ARRb2)抑制蛋白β2(ARRβ2)檢測試劑盒(聯免疫吸附試驗法)規格：48T/96T

 Defensin Beta 1 (DEFb1)防御β1(DEFβ1)檢測試劑盒(聯免疫吸附試驗法)規格：48T/96T

 Fetuin B (FETUB)胎球蛋白B(FETUB)檢測試劑盒(聯免疫吸附試驗法)規格：48T/96T

 Apolipoprotein C2 (APOC2)載脂蛋白C2(APOC2)檢測試劑盒(聯免疫吸附試驗法)規格：48T/96T

 Apolipoprotein A5 (APOA5)載脂蛋白A5(APOA5)檢測試劑盒(聯免疫吸附試驗法)規格：48T/96T

 Cadherin 16 (CDH16)KSP鈣黏蛋白(CDH16)檢測試劑盒(聯免疫吸附試驗法)規格：48T/96T

 Haptoglobin Related Protein (HPR)觸珠蛋白相關蛋白(HPR)檢測試劑盒(聯免疫吸附試驗法)規格：48T/96T

 Cadherin, Myotubule (CDH15)肌微管鈣黏附蛋白(CDH15)檢測試劑盒(聯免疫吸附試驗法)規格：48T/96T
白介素-3APOE4/Apolipoprotein E4  載脂蛋白E4抗體規格: 0.2ml

ITM2A  完整膜蛋白E25A抗體規格: 0.2ml

APOJ/Clusterin  載脂蛋白J抗體規格: 0.1ml

JWA  JWA蛋白抗體規格: 0.2ml

Kazrin  Kazrin蛋白抗體規格: 0.2ml

LCE1A  晚期包膜蛋白1抗體規格: 0.2ml

LCE2B  晚期包膜蛋白2B抗體規格: 0.2ml

NOL1  增殖相關核仁抗原抗體規格: 0.2ml
實驗報告：

一、分離與培養：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；

5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。