當前位置:上海撫生實業有限公司>>核酸檢測試劑盒>>熒光PCR法>> 50T沙門氏菌SPP-sdfi核酸檢測試劑盒
參數規格:
產品名稱:沙門氏菌SPP-sdfi核酸檢測試劑盒
產品規格:50T
產品貨號:FS-P10416
產品分類:熒光PCR法
產品運輸:低溫運輸
儲存條件:-20℃避光保存,避免反復凍融。
運輸:低溫、避光,快遞免費送貨上門。
產品特點:
本產品就是根據保守區設計引物而開發的高靈敏 PCR檢測試劑盒 。?
實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
實時熒光定量PCR:
實時熒光定量PCR技術有效地解決了傳統定量只能終點檢測的局限,實現了每一輪循環均檢測一次熒光信號的強度,并記錄在電腦軟件之中,通過對每個樣品Ct值的計算,根據標準曲線獲得定量結果。因此,實時熒光定量PCR無需內標是建立在兩個基礎之上的:
1)Ct值的重現性PCR循環在到達Ct值所在的循環數時,剛剛進入真正的指數擴增期(對數期),此時微小誤差尚未放大,因此Ct值的重現性,即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內擴增,得到的Ct值是恒定的。
2)Ct值與起始模板的線性關系由于Ct值與起始模板的對數存在線性關系,可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定,因此,實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。
外標準曲線的定量方法相比內標法是一種準確的、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量最準確,重現性*定量方法,已得到的*,廣泛用于基因表達研究、轉基因研究,藥物療效考核、病原體檢測等諸多領域。
定量PCR方法:
a、競爭法
選擇由突變克隆產生的含有一個新內切位點的外源競爭性模板。在同一反應管中,待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增(其中一個引物為熒光標記)。擴增后用內切酶消化PCR產物,競爭性模板的產物被酶解為兩個片段,而待測模板不被酶切,可通過電泳或高效液相將兩種產物分開,分別測定熒光強度,根據已知模板推測未知模板的起始拷貝數。
b、內參照法
在不同的PCR反應管中加入已定量的內標和引物,內標用基因工程方法合成。上游引物用熒光標記,下游引物不標記。在模板擴增的同時,內標也被擴增。在PCR產物中,由于內標與靶模板的長度不同,二者的擴增產物可用電泳或高效液相分離開來,分別測定其熒光強度,以內標為對照定量待檢測模板。
c、PCR-ELISA法
利用di高辛或生物素等標記引物,擴增產物被固相板上特異的探針所結合,再加入抗di高辛或生物素酶標抗體-辣根過氧化物酶結合物,最終酶使底物顯色。常規的PCR-ELISA法只是定性實驗,若加入內標,作出標準曲線,也可實現定量檢測目的。
植物乳桿菌培養基: 6模式菌株: no污泥提供形式: 凍干物安全等級: 1生長條件: 37℃ -80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法
-532℃冰箱凍結;真空冷凍干燥
釀酒酵母培養基: CM0077酒精釀造提供形式: 斜面培養物安全等級: 1模式菌株: no生長條件: 28℃ -80℃冰箱凍結法
AS1.2620=ATCC15442=DSM939=NCIMB10421測定抗菌防腐劑,紡織品的細菌耐藥性檢測,藥效試驗,質量控制菌株。模式菌株: no種屬: Pseudomonasaeruginosa動物房水的瓶子安全等級: 1培養基: 2、109生長條件: 37℃
白色鏈霉菌生長條件: 28℃培養基: 0012提供形式: 斜面培養物安全等級: 1模式菌株: no -80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法
熒光假單胞菌分類、研究,具有處理富營養水體和養殖廢水潛力。模式菌株: no土壤提供形式: 凍干物安全等級: 1培養基: 0002生長條件: 28℃
不解糖假蒼白桿菌潛在的有機污染物降解菌/分離自十溴聯醚富集菌群模式菌株: no沉積物/表層沉積物提供形式: 凍干物安全等級: 1培養基: 471生長條件: 28℃
哲拉什黃桿菌產酶微生物/產蛋白酶菌株模式菌株: no沉積物/深灰色沉積物提供形式: 凍干物安全等級: 1培養基: 821生長條件: 15℃
-533℃冰箱凍結;真空冷凍干燥
傳染性法氏囊病病用于科研模式菌株: no病雞提供形式: 凍結物安全等級: 2培養基: 0生長條件: 37
DH5α(含pUC19質粒)大腸桿菌培養基: LB培養基,含50μg/mL氨芐青霉素鈉。
酵母提取物 5.0 g,蛋白胨 10.0 g,NaCl 10.0 g,瓊脂 15.0 g,蒸餾水 1.0 L,pH 7.0。121℃,15min滅菌。 滅菌結束,冷卻降溫后加入氨芐青霉素鈉,使培養基中氨芐青霉素鈉終含量為50μg/mL。pUC19質粒提取。提供形式: 西林瓶,菌片安全等級: 1模式菌株: no生長條件: 37℃ ,好氧 -20℃避光保存;運輸條件:常溫運輸。
ATCC19258巴氏滅菌典型株。模式菌株: no種屬: Streptococcus│thermophilus提供形式: 凍干物安全等級: 1培養基: CM0503生長條件: 37℃
沙福芽孢桿菌培養基: 33共生微生物/野生鯔魚腸道共生菌 產酶微生物/脂酶(三丁甘油酯)、蛋白酶、纖維素酶生物樣/野生鯔魚腸道內容物提供形式: 凍干物模式菌株: no生長條件: 28℃ 液氮超低溫凍結法;-80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法
美味牛肝菌食用菌模式菌株: no子實體提供形式: 斜面培養物安全等級: 1培養基: 150生長條件: 28-30
白色假絲酵母生長條件: 28℃安全等級: 1模式菌株: no培養基: 13
-534℃冰箱凍結;真空冷凍干燥
硫化鈉(陰涼)wo7ium sulfide (cool)AR500g
AAL03-1KGDL-Arginine DL-精安鹽鹽1119-34-287
CA2021-25mgAmphotericin B,solubilized 可溶性兩性霉素B1397-89-325MG
SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液(5X)2ml
Nalidixic Acid250g
價甲酯metxyl formate色標10ml
ER0503HindIII, HC25000 units13
GE859-1GG-418 sulfate [Geneticin]108321-42-21g
Dextran Sulfate50g
6-安基已6-aminocaproic acidBR25g
大鼠胰島素樣生長因子結合蛋白5(IGFBP-5)ELISA試劑盒 ,英文名: IGFBP-5 ELISA Kit
人抗核仁抗體(ANA)ELISA檢測試劑盒Humanai-nucleolusaibody,ANAELISAKit 96T/48T
大鼠β-防御素(β-Defensins)免疫試劑盒 Rat β-Defensins ELISA Kit
CLIAKitforSyk(Humanspleeyrosinekinase)ELISAKit人脾臟酪氨激酶規格:48T/96T
人體N-乙酰轉移酶1(NAT1)活性熒光定量檢測試劑盒20次
ELISAKitAb人抗促甲狀腺素受體抗體規格:48T/96T
沙門氏菌SPP-sdfi核酸檢測試劑盒柴胡皂苷B中文別名:柴胡皂甙B
英文名:Saikosaponin B
登錄號:新品待定
分子結構:
外觀:白色粉末
規格:20 mg/支
純度:≥ 98%
用途:用于含量測定/鑒定/藥理實驗等。
提取來源:傘形科植物阿爾泰柴胡Bupleurum krylovianum Schischk.ex Kryl.
溶解性:可溶于水,不溶于等有機溶劑。
藥理藥效:抗炎、抗病、抗腫瘤。
貯存條件: 4℃冷藏、密封、避光
有效期: 2年
PCR的反應條件:
因擴增片段的大小、反應體積、使用擴增儀器的不同而不同。
◇ 循環次數
根據模板DNA的量以及擴增片段的大小,設定25~30個循環。
如果循環次數太少,擴增量不足;如果循環次數太多,則會出現Smear。
◇ Anneal以及Extension
合適的Anneal溫度通常在45~68℃之間 (預備實驗可2℃間隔進行)。另外,由于在60~68℃間,也有很高的活性, 因此可在此溫度范圍內設定Anneal-Extension溫度, 進行2 Step PCR。Anneal-Extension溫度為68℃ 時,每kbp大體可設定30秒~1分鐘;當溫度設定在68℃以下時, 時間設定可稍長一些。通常,Anneal溫度太高,有時會得不到擴增產物;Anneal溫度太低時,容易發生非特異性反應。另外,Extension時間太短時,會得不到擴增產物或者會有一些短的非特異性產物優成;而Extension時間太長時,會出現Smear。
請輸入賬號
請輸入密碼
請輸驗證碼
以上信息由企業自行提供,信息內容的真實性、準確性和合法性由相關企業負責,儀表網對此不承擔任何保證責任。
溫馨提示:為規避購買風險,建議您在購買產品前務必確認供應商資質及產品質量。