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乳酸脫氫酶染色液(四唑鹽法)

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所  在  地上海市

更新時間:2022-05-16 15:20:22瀏覽次數:171次

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貨號 FS-X10023
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中文名稱:乳酸脫氫酶染色液(四唑鹽法)

英文名稱:

產品規格:2×50ml

貨號:FS-X10023

產品介紹:

用途:

乳酸脫氫酶染色

注意事項:

主要由四氮唑藍孵育液、陰性對照組成。染色后酶活性部位呈藍紫色沉淀。

儲存條件:4℃,避光,6個月

培養操作步驟:

1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;

2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養板(每孔一片)或培養皿中(每個平皿可放置2-3片);

3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;

4.將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中,使蓋玻片*浸在培養液中;

5.將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時,將培養板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

實驗報告:

一、分離與培養:

1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小;

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置;

3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養;

5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養;

二、免疫熒光鑒定:

1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;

2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;

5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數目,需根據細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.

2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。

8、結果分析

a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

短芽孢桿菌表皮生長因子樣蛋白2抗體Human GPRC5A(G Protein Coupled Receptor, Family C, Group 5, Member A) 人內質網蛋白29(ERP29/C12orf8/ERP28)免疫試劑盒

Sphingobium amiense脊索生成樣蛋白1抗體Human GR(Glutathione Reductase) 人內脂/內臟脂肪(visfatin)免疫試劑盒

大豆慢生根瘤菌神經誘導胚胎發育相關蛋白Churchill抗體Human F13(Coagulation Factor XIII) 人內臟脂肪特異性絲蛋白抑制劑(vaspin)免疫試劑盒

二氫嘧啶相關蛋白3抗體Human Grb10(Growth Factor Receptor Bound Protein 10) 人內源性糖皮質激(GC)免疫試劑盒

藤黃微球菌轉錄激活蛋白CRSP9抗體Human F5(Coagulation Factor V/Plasma Factor V) 人內源性分泌型糖基化終產物受體(esRAGE)免疫試劑盒

毛栓孔菌神經網蛋白CopineVI抗體Human Grb2(Growth Factor Receptor Bound Protein 2) 人內皮脂肪(EL)免疫試劑盒

糙孢籃狀菌腦型肉堿棕櫚酰轉移1C抗體Human F13B(Coagulation Factor XIII B Polypeptide) 人內皮抑(ES)免疫試劑盒

大球蓋菇補體因子B抗體Human EPHA1(Ephrin Type A Receptor 1) 人內皮型一氧化氮合成(eNOS)免疫試劑盒

韓國鞘單胞菌乙酰受體前體蛋白AChRα1抗體Human F7(Coagulation Factor VII) 人內皮特異分子-1(ESM-1)免疫試劑盒

*正紅菇豬瘟病包膜糖蛋白E2抗體Human ERK(ELK-Related Tyrosine Kinase) 人內皮2(EDN2)免疫試劑盒

釀酒酵母冷休克結構域蛋白C2抗體Human EPHA10(Ephrin Type A Receptor 10) 人內皮1受體(EDNRA)免疫試劑盒

多汁乳菇碳酐10抗體Human EPYC(Epiphycan) 人內皮1(ET-1)免疫試劑盒

淺黃微桿菌L選擇抗體Human EphA2(Tyrosine protein kinase receptor A2) 人內肽2(EM-2)免疫試劑盒

榛針孢酵母致癌基因C-Myc抗體Human EphA2(Tyrosine protein kinase receptor A2) 人母親DPP同源物4(Smad 4)免疫試劑盒

腸膜明串珠菌腸膜亞種膽囊收縮8抗體Human ERK(ELK-Related Tyrosine Kinase) 人末端脫氧核轉移(TdT)免疫試劑盒

乳桿菌屬上皮鈣粘附分子抗體Human ERK1(Extracellular Signal Regulated Kinase 1) 人末端補體復合物C5b-9(TCC C5b-9)免疫試劑盒

釀酒酵母Saccharomyces│cerevisiae 質量規格:D,99.9%apelin 12試劑盒臭椿

弗蘭克氏菌Frankia│sp. 質量規格:D,99.9%AP-5復合物β亞基試劑盒茶多

香菇Lentinula│edodes (Berk.) Pegler 質量規格:D,99.96%alpha突觸核蛋白試劑盒橙黃Ⅳ
乳酸脫氫酶染色液(四唑鹽法)聚貪噬 1-乙基-3-鎓乙磺鹽狂犬病 IGM

多形炭角* 3-甲氧基-5-三氟愛潑斯坦-巴爾病 IGM

貝倫格葡萄座腔梨生專化型 6-溴-2,3-二氟苯基二氫脫氫

單胞 2-氨基-3-溴-5-氟吡啶Klotho蛋白β

壞損尾孢 1-氨基-3,6,9-三噁-11-十一8-羥基(脫氧)鳥

氧化微桿 14-疊氮-3,6,9,12-四氧十四烷可溶性血管內皮生長因子受體2

微小毛霉 3,6-二氨基咔唑肌肉肌激

番茄枯萎病 檸檬二氫可溶性血小板膜糖蛋白Ⅵ

擬青霉 (乙)[(2-聯苯)二叔丁基膦]六氟銻金(I)雄酮

淡紫擬青霉 Benazepril HCl序列相似家族150成員A

豇豆慢生根瘤 C5-18-全氟烷腺核

尖孢鐮刀 3--2,6-二氟苯GFAP的降解產物

聚生殼 Fmoc-Phe-OPfpⅠ型質膜蛋白

黃瓜枯萎 Fmoc-Pro-OPfp腦膜炎奈瑟IgM抗體

枯草芽孢桿 Fmoc-Gly-OPfp活性氮簇

 


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