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碘化丙啶PI染色液(50μg/ml,含RNase)

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產(chǎn)品型號

品       牌其他品牌

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更新時間:2022-05-11 16:32:41瀏覽次數(shù):182次

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中文名稱:碘化丙啶PI染色液(50μg/ml,含RNase)

英文名稱:

產(chǎn)品規(guī)格:10ml

貨號:FS-X9887

產(chǎn)品介紹:

用途:

流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞凋亡、細(xì)胞周期等,主要用于DNA染色。

注意事項:

Propidium Iodide簡稱PI,又稱碘化丙啶,分子量為668.40,對人體有刺激性,本試劑中含Rnase A,RNase濃度200ug/ml。

儲存條件:-20℃,避光,6個月

培養(yǎng)操作步驟:

1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;

2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);

3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;

4.將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;

5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

實驗報告:

一、分離與培養(yǎng):

1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小;

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;

3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);

二、免疫熒光鑒定:

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;

2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;

5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞,細(xì)胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD)×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

黑根霉銜接蛋白α-Adaptin抗體Human LYRM7 小鼠幽門螺旋桿菌抗體(IgM)免疫試劑盒

粘性絲孢酵母凋亡蛋白活性因子-1抗體(C端)Human LYPLAL1 小鼠幽門螺旋桿菌抗體(IgG)免疫試劑盒

黑曲霉凋亡蛋白活性因子-1抗體(N端)Human LYAR 小鼠印度猬因子(IHH)免疫試劑盒

冷溫木拉克酵母三磷腺結(jié)合轉(zhuǎn)運蛋白G超家族成員2抗體Human LY6K 小鼠2,3-雙加氧1(IDO1)免疫試劑盒

長枝木霉載脂蛋白E抗體Human LYN 小鼠音猬因子N端(Shh-N)免疫試劑盒

雞傷門氏菌淀粉樣肽前體蛋白抗體Human LYG1 小鼠抑制B(INH-B)免疫試劑盒

彎孢菌水通道蛋白-2抗體Human LY96 小鼠抑制A(INH-A)免疫試劑盒

枯草芽孢桿菌血管緊張原抗體Human LYPLAL1 小鼠抑瘤M(OSM)免疫試劑盒

大腸埃希氏桿菌雄激受體抗體Human LYRM7 小鼠乙型肝炎核心抗體(HBcAb)免疫試劑盒

茯苓死亡調(diào)節(jié)蛋白抗體(凋亡、半胱蛋白激活抑制劑)Human LYPLA1 小鼠乙型肝炎表面抗原(HBsAg)免疫試劑盒

熒光假單胞菌軸蛋白1抗體Human LUC7L 小鼠乙型肝炎表面抗體(HBsAb)免疫試劑盒

美澳型核果褐腐病菌自噬相關(guān)蛋白9B抗體Human LUC7L2 小鼠乙型肝炎e抗原(HBeAg)免疫試劑盒

放線纖維菌自噬相關(guān)蛋白12抗體Human LSM8 小鼠乙型肝炎e抗體(HBeAb)免疫試劑盒

藍色犁頭霉自噬相關(guān)蛋白13抗體Human LSM5 小鼠乙酰 免疫試劑盒

休哈塔假絲酵母自噬相關(guān)蛋白3抗體Human LSP1 小鼠乙酰酯(AChE)免疫試劑盒

連香樹迪茲氏菌整合樣金屬蛋白與凝血4型抗體Human LSM7 小鼠乙酰受體抗體(AChRab)免疫試劑盒

小單孢菌屬菌種Micromonospora│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>98%,進分吡哆/吡哆維生B6磷試劑盒乙酰黃芪皂I

天津棒桿菌Corynebacterium│tianjin 質(zhì)量規(guī)格:BR吡哆/吡哆維生B6激試劑盒鹽去氫駱駝蓬堿

pCas(#62225)pCas(#62225) 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR鼻病試劑盒右旋四氫巴馬汀
碘化丙啶PI染色液(50μg/ml,含RNase)北方蜜環(huán) 美拉諾坦半胱蛋白9

釀酒酵母 17-AAG載脂蛋白E2

鏈霉 3--4-氟苯甲糖類抗原

白地霉 Bovine adrenal medulla dodecapeptide血小板衍生生長因子AA

天藍褐鏈霉 4-氟-3-硝基芐真核翻譯起始因子4E結(jié)合蛋白1

釀酒酵母 2-甲氧基-3-連接橋粒斑珠蛋白

大腸埃希 Regorafenib (BAY 73-4506)抗鏈球溶血0

膠孢 [Arg8]-Vasotocin acetate saltF肌動蛋白

pET-23a NVP-AUY922Talin-1

馬賽 2-甲氧基-3-硝基吡啶δ-維生E

堅強芽孢桿 雙(2-甲氧乙基)氨基三氟化硫(BAST)γ-維生E

擬雷氏日歸殼 1H-1,2,3-三氮唑-4-鹽鹽α-維生E

陰溝腸桿 3,5-二-2-硝苯β-胡蘿卜

腸膜明串珠 -氟-4-甲基-5-硝苯黃體生成釋放

圓弧青霉 2--3-氟-4-羥基吡啶溶體相關(guān)膜蛋白2抗體

 


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