細胞培養操作規程：

一．培養基及培養凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優質胎牛血清，10%。

2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

產品屬于：

產品名稱：成骨細胞    

產品規格：5×105

貨號：FS-01X9854

產品類型：原代細胞

單位：T25/瓶

提供細胞鑒定：提供化學染色報告

保存培養溫度（℃）：37

運輸溫度（℃）：常溫

細胞培養的優點：

注意事項：

大鼠胰島樣生長因子結合蛋白3(IGFBP-3)ELISA試劑盒英文名稱：Rat Insulin-like growth factor binding protein 3,IGFBP-3 ELISA Kit規格:96T/48T

大鼠血管內皮細胞生長因子D(VEGF-D)ELISA試劑盒英文名稱：Rat Vascular Endothelial cell Growth Factor D,VEGF-D ELISA Kit規格:96T/48T

大鼠胰島樣生長因子結合蛋白2(IGFBP-2)ELISA試劑盒英文名稱：Rat Insulin-like growth factor binding protein 2,IGFBP-2 ELISA Kit規格:96T/48T

大鼠血管內皮細胞生長因子受體1(VEGFR-1/Flt1)ELISA試劑盒英文名稱：Rat Vascuoar endothelial cell growth factor receptor 1,VEGFR-1/Flt1 ELISA Kit規格:96T/48T

大鼠胰島樣生長因子結合蛋白1(IGFBP-1)ELISA試劑盒 英文名稱：Rat Insulin-like growth factor binding protein 1,IGFBP-1 ELISA Kit規格:96T/48T

大鼠血管內皮細胞生長因子受體2(VEGFR-2/Flk-1)ELISA試劑盒英文名稱：Rat Vascuoar endothelial cell growth factor receptor 2,VEGFR-2/Flk-1 ELISA Kit規格:96T/48T

大鼠肝細胞生長因子(HGF)ELISA試劑盒英文名稱：Rat hepatocyte growth factor,HGF ELISA Kit規格:96T/48T

大鼠糖蛋白130(gp130)ELISA試劑盒英文名稱：Rat glucoprotein 130,gp130 ELISA Kit規格:96T/48T

大鼠生長(GH)ELISA試劑盒英文名稱：Rat growth hormone,GH ELISA Kit規格:96T/48T

大鼠粒細胞集落刺激因子(G-CSF)ELISA試劑盒英文名稱：Rat Granulocyte Colony Stimulating Factor,G-CSF ELISA Kit規格:96T/48T

大鼠中性粒細胞趨化蛋白2(NAP-2/CXCL7)ELISA試劑盒英文名稱：Rat neutrophil activating protein-2,NAP-2 ELISA Kit規格:96T/48T

大鼠FMS樣酪激3(Flt3)ELISA試劑盒英文名稱：Rat FMS-like tyrosine kinase 3,Flt3 ELISA Kit規格:96T/48T

大鼠FMS樣酪激3配體(Flt3L)ELISA試劑盒英文名稱：Rat FMS-like tyrosine kinase 3 ligand,Flt-3L ELISA Kit規格:96T/48T

大鼠堿性成纖維細胞生長因子9(bFGF-9)ELISA試劑盒英文名稱：Rat basic fibroblast growth factor 9,bFGF-9 ELISA Kit規格:96T/48T

大鼠堿性成纖維細胞生長因子4(bFGF-4)ELISA試劑盒英文名稱：Rat basic fibroblast growth factor 4,bFGF-4 ELISA Kit規格:96T/48T

大鼠堿性成纖維細胞生長因子6(bFGF-6)ELISA試劑盒英文名稱：Rat basic fibroblast growth factor 6,bFGF-6 ELISA Kit規格:96T/48T

大鼠性成纖維細胞生長因子1(aFGF-1)ELISA試劑盒英文名稱：Rat acidic fibroblast growth factor 1,aFGF-1 ELISA Kit規格:96T/48T

大鼠凋亡相關因子配體(FASL) ELISA試劑盒 英文名稱：Rat Factor-related Apoptosis ligand,FASL ELISA Kit規格:96T/48T
成骨細胞RCC2  染色體濃縮調節蛋白2抗體規格: 0.2ml

SEPT1  細胞分化蛋白SEP1抗體規格: 0.2ml

SEPT10  細胞分化蛋白SEPT10抗體規格: 0.2ml

SEPT12  細胞分化蛋白SEPT12抗體規格: 0.2ml

SEPT14  細胞分化蛋白SEPT14抗體規格: 0.2ml

SPECC1L  細胞質和紡錘體機化蛋白A抗體規格: 0.2ml

Septin 3  神經元特異性蛋白3抗體規格: 0.2ml

UCHL5IP  泛羧基末端水解5互相作用蛋白1抗體規格: 0.2ml
實驗報告：

一、分離與培養：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；

5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。