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上海撫生實(shí)業(yè)有限公司
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神經(jīng)HRP示蹤顯色液(TMB法)

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產(chǎn)品型號(hào)

品       牌其他品牌

廠商性質(zhì)經(jīng)銷商

所  在  地上海市

更新時(shí)間:2022-05-16 15:40:29瀏覽次數(shù):173次

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貨號(hào) FS-X10075
神經(jīng)HRP示蹤顯色液(TMB法)正在熱銷的產(chǎn)品:ADAM10/MADM/CD156c/FITC 熒光標(biāo)記去整合樣金屬蛋白10抗體IgG3,5-二酰 97%
ADAM-TS7/FITC 熒光標(biāo)記整合樣金屬蛋白與凝血1型-7抗體IgG2,5-二苯 97%
14-3-3 family protein/FITC 熒光標(biāo)記植物14-3-3蛋白抗體IgG2,3-二 98%
ADAM-TS7/FITC

產(chǎn)品介紹:

用途:

神經(jīng)HRP示蹤TMB(四甲基聯(lián))顯色,反應(yīng)較DAB法靈敏。

注意事項(xiàng):

主要由TMB孵育液、、乙酸鈉緩沖液等組成,染色后呈藍(lán)色。

儲(chǔ)存條件:4℃,避光,12個(gè)月

中文名稱:神經(jīng)HRP示蹤顯色液(TMB法)

英文名稱:

產(chǎn)品規(guī)格:50T

貨號(hào):FS-X10075

實(shí)驗(yàn)報(bào)告:

一、分離與培養(yǎng):

1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小;

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;

3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);

二、免疫熒光鑒定:

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;

2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜;

5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

培養(yǎng)操作步驟:

1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;

2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);

3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);

4.將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;

5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

金針菇組織蛋白G抗體Human RAG1(V(D)J recombination-activating protein 1) 人法尼基二磷法尼基轉(zhuǎn)移1(FDFT1)免疫試劑盒

解脂鹽紅菌激分子B7-1蛋白抗體Human DUT(Deoxyuridine 5′-triphosphate nucleotidohydrolase, mitochondrial) 人法尼X受體(FXR)免疫試劑盒

鴨疫里氏桿菌1號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框145抗體Human SCARB1(Scavenger receptor class B member 1) 人二酰基甘油(DAG/DG)免疫試劑盒

南類芽孢桿菌20號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框186抗體Human NFATC1(Nuclear factor of activated T-cells, cytoplasmic 1) 人二肽基肽Ⅳ(DPPⅣ)免疫試劑盒

猬木霉角蛋白7抗體Human HTN3(Histatin-3) 人二氫嘧啶脫氫[NADP+](DPYD)免疫試劑盒

溶血不動(dòng)桿菌基因型4間隙連接蛋白26抗體Human SRD5A1(3-oxo-5-alpha-steroid 4-dehydrogenase 1) 人二氫嘧啶樣3(DPYSL3)免疫試劑盒

貝倫格葡萄座腔菌膜輔蛋白抗體Human EPCA2(Early Prostate Cancer Antigen 2) 人二氫嘧啶樣2(DPYSL2)免疫試劑盒

鴨疫里氏桿菌F肌動(dòng)蛋白α1亞基抗體Human MADCAM1(Mucosal addressin cell adhesion molecule 1) 人二羥基賴正己(DHLNL)免疫試劑盒

抗生鏈霉菌CD8抗體Human NEO1(Neogenin) 人二磷腺(ADP)免疫試劑盒

黃桿菌CD8抗體Human NAIP(Baculoviral IAP repeat-containing protein 1) 人二磷尿核葡糖基轉(zhuǎn)移2家族肽B4(UGT2B4)免疫試劑盒

小孢根霉原變種表面趨化因子受體2抗體Human PACRG(Parkin coregulated gene protein) 人二氧化(DAO)免疫試劑盒

中慢生根瘤菌胱抑B/半胱蛋白抑制劑B抗體Human CX3CR1(CX3C chemokine receptor 1) 人兒茶抑免疫試劑盒

溜曲霉趨化樣蛋白抗體Human JUP(Junction plakoglobin) 人兒茶(CA)免疫試劑盒

多孢木霉角蛋白20抗體Human CFL1(Cofilin-1) 人鵝膏蕈堿免疫試劑盒

蘇云金芽胞桿菌鈣激活的中性蛋白2抗體Human EPCA2(Early Prostate Cancer Antigen 2) 人多藥耐藥相關(guān)蛋白(MRP)免疫試劑盒

臭曲霉CD45RO抗體Human IZUMO1(Izumo sperm-egg fusion protein 1) 人多效生長(zhǎng)因子(PTN)免疫試劑盒

短鏈孢霉屬Selenotila│sp. 質(zhì)量規(guī)格:鈉型榿木

根霉Rhizopus│sp. 質(zhì)量規(guī)格:for GC,≥99.5%(GC)款冬

Methanobrevibacter smithiiMethanobrevibacter smithii 質(zhì)量規(guī)格:Standard for GC,≥99.5%(GC)偽原薯蕷皂
神經(jīng)HRP示蹤顯色液(TMB法)水稻漢納酵母 N'-芴甲氧羰基-N-芐氧羰基-L-賴硝還原

需鈉弧 1-萘磺酰血紅氧合1

枯草芽孢桿 2,5-二血凝;凝集

禽腦脊髓炎病 2,5-二氟溴芐煙酰腺二核磷

大靈芝 1-丁基-3-甲基咪唑溴鹽氧化型

*櫻桃鏈格孢 2,6-二氟葉綠a

漢遜德巴利酵母 2-溴-4-甲基-5-氟吡啶葉綠b

稀疏鏈霉稀疏變種 1-N-Cbz-3-基葉綠

芽孢桿 吲唑-6-

三葉草根瘤 3-溴噠一氧化氮

產(chǎn)黑色鏈霉 2,5-二氨基苯磺胰蛋白抑制劑

黃桿 3-氨基-5-氟甲酯乙烯

藍(lán)色犁頭霉 3-溴-2-氟-4-乙酰羧化

白地霉 3-氨基-5-溴-2-甲氧基吡啶乙酰羧化

球毛殼 6-(1-甲基乙氧基)-3-吡啶甲乙酰羧化合成

 


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