細胞培養操作規程：

一．培養基及培養凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優質胎牛血清，10%。

2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

產品屬于：

產品名稱：胰島細胞    

產品規格：5×105

貨號：FS-01X9830

產品類型：原代細胞

單位：T25/瓶

提供細胞鑒定：提供免疫熒光鑒定報告

保存培養溫度（℃）：37

運輸溫度（℃）：常溫

細胞培養的優點：

注意事項：

大鼠腎上腺髓質(ADM)ELISA試劑盒 英文名稱：Rat adrenomedullin,ADM ELISA Kit規格:96T/48T

大鼠β內啡受體(β-EPR)ELISA試劑盒英文名稱：Rat Beta-Endorphin receptor,β-EPR ELISA Kit規格:96T/48T

大鼠鈣/鈣調依賴性蛋白激2(CAMK 2)ELISA試劑盒英文名稱：Rat calcium/calmodulin-dependent protein kinase-Ⅱ,CAMK 2 ELISA Kit規格:96T/48T

大鼠肝脂(HL)ELISA試劑盒英文名稱：Rat hepatic lipase,HL ELISA Kit規格:96T/48T

大鼠煙堿型乙酰受體(N-AChR)ELISA試劑盒英文名稱：Rat nicotinic acetylcholine receptor,N-AChR ELISA Kit規格:96T/48T

大鼠毒蕈堿型乙酰受體(M-AChR)ELISA試劑盒 英文名稱：Rat muscarinic acetylcholine receptor,M-AChR ELISA Kit規格:96T/48T

大鼠活化蛋白C(APC)ELISA試劑盒英文名稱：Rat activated protein C,APC ELISA Kit規格:96T/48T

大鼠甘丙/甘丙(GAL)ELISA試劑盒英文名稱：Rat galanin,GAL ELISA Kit規格:96T/48T

大鼠α葡萄糖(a-Glu)ELISA試劑盒英文名稱：Rat α-Glucosidase,a-Glu ELISA Kit規格:96T/48T

大鼠破骨細胞分化因子(ODF)ELISA試劑盒英文名稱：Rat osteoclast differentiation factor,ODF ELISA Kit 規格:96T/48T

大鼠Toll樣受體9(TLR-9/CD289)ELISA試劑盒 英文名稱：Rat Toll-like receptor 9,TLR-9 ELISA Kit 規格:96T/48T

大鼠鉤端螺旋體IgG(Lep IgG)ELISA試劑盒 英文名稱：Rat Leptospira IgG,Lep IgG ELISA Kit 規格:96T/48T

大鼠熱休克因子1(HSF1)ELISA試劑盒英文名稱：Rat Heat Shock Factor 1,HSF1 ELISA Kit 規格:96T/48T

大鼠β羥丁(βOHB)ELISA試劑盒英文名稱：Rat Beta-Hydroxybutyric Acid,β-OHB ELISA Kit 規格:96T/48T

大鼠細胞色P450(CYP450)ELISA試劑盒英文名稱：Rat cytochrome P450,CYP450 ELISA Kit規格:96T/48T

大鼠生長釋放ghrelin(GHRP-Ghrelin)ELISA試劑盒 英文名稱：Rat growth hormone releasing peptide-Ghrelin,GHRP-Ghrelin ELISA Kit 規格:96T/48T

大鼠內臟脂肪特異性絲蛋白抑制劑(vaspin)ELISA試劑盒 英文名稱：Rat Visceral adipose-specific serine protease inhibitor,vaspin ELISA Kit 規格:96T/48T

大鼠溴脫氧核(BrdU)ELISA試劑盒 英文名稱：Rat Bromodeoxyuridine,BrdU ELISA Kit 規格:96T/48T
胰島細胞Blood Group Kell Antigen/CD238  凱爾血型糖蛋白CD238抗體規格: 0.2ml

Blood Group Lewis a  血型Lewis a抗體規格: 0.2ml

DARC/CD234  Duffy血型趨化因子受體抗體規格: 0.2ml

Galactosidase alpha  α-半乳糖抗體規格: 0.2ml

Ankyrin erythroid  紅細胞蛋白Ank1抗體規格: 0.2ml

PPM1F  鈣調蛋白依賴性蛋白激磷抗體規格: 0.2ml

RIP3  受體結合蘇3抗體規格: 0.2ml

RIP5/RIPK5  受體結合蘇5抗體規格: 0.2ml
實驗報告：

一、分離與培養：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；

5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。